腫瘤相關(guān)基因的突變檢測及功能和調(diào)控研究.pdf

1、第一部分：中國人乳腺癌相關(guān)基因BRCA1/2基因的突變檢測及LOVD數(shù)據(jù)庫構(gòu)建
　　 目的：作為國際基因變異組計(jì)劃的一部分(HVP-China)，利用LOVD格式，構(gòu)建一個(gè)針對中國人群的BRCA1/2基因變異新數(shù)據(jù)庫。
　　 方法：搜索PubMed以及一些中文數(shù)據(jù)庫如萬方、維普等，收集所有在中國人群中報(bào)道過的BRCA1/2基因的變異，將其以正確的格式提交到LOVD數(shù)據(jù)庫。此外，在臨床基因檢測過程中，收集家族性乳腺癌和早發(fā)

2、性乳腺癌患者的外周血樣本，提取DNA，利用PCR和測序檢測BRCA1基因的變異，并將新發(fā)現(xiàn)的變異提交到數(shù)據(jù)庫。
　　 結(jié)果：到目前為止，根據(jù)我們數(shù)據(jù)庫中的內(nèi)容，在中國人的BRCA1和BRCA2基因上已經(jīng)分別發(fā)現(xiàn)了136和62個(gè)不同的變異。與其他種族的人群相比，中國人有其獨(dú)特的BRCA1/2基因突變熱點(diǎn)和高頻突變。在這兩個(gè)基因上的14個(gè)最常見的致病突變中，有50％是BIC數(shù)據(jù)庫中未報(bào)到過的。
　　 結(jié)論：在中國人群中建立了

3、第一個(gè)BRCA1/2基因變異數(shù)據(jù)庫。BRCA1/2基因在中國人中的突變與其他種族的人群有所不同。該數(shù)據(jù)庫的建立有助于科研工作者和臨床醫(yī)生對遺傳性乳腺癌和卵巢癌以及其它由BRCA1/2基因突變引起的腫瘤的研究、檢測和診斷，尤其有利于今后中國人群的BRCA1/2基因檢測。
　　 第二部分：DTWD1基因在胃癌中的功能和調(diào)控研究
　　 目的：明確DTWD1基因在胃癌細(xì)胞中的功能，尋找其可能的調(diào)控因子以及其調(diào)控機(jī)制。
　　

4、 方法：在正常胃細(xì)胞和胃癌細(xì)胞系中、TSA處理前后的胃癌細(xì)胞中以及臨床手術(shù)收集的正常和胃癌組織中，用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測DTWD1的表達(dá)水平。用不同的HDACsiRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞，以明確DTWD1的表達(dá)主要是受到哪一個(gè)HDAC的抑制。熒光素酶報(bào)告基因分析用于確定DTWD1基因的啟動(dòng)子區(qū)域，然后用Ch1P檢測p53蛋白和DTWD1啟動(dòng)子的結(jié)合情況。為了驗(yàn)證DTWD1的基因的抑癌功能，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染DTWD1表達(dá)載體或siRNA后進(jìn)行M

5、TS和克隆形成試驗(yàn)。Westernblot用于檢測蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：DTWD1在胃癌中表達(dá)下調(diào)，TSA處理或轉(zhuǎn)染HDACsiRNA能上調(diào)其表達(dá)。DTWD1在胃癌中的下調(diào)主要是受到HDAC3的抑制。P53蛋白能夠與DTWD1啟動(dòng)子結(jié)合并促進(jìn)其表達(dá)，而HDAC3會(huì)影響兩者的結(jié)合作用。在胃癌細(xì)胞中過表達(dá)外源DTWD1能夠抑制細(xì)胞的生長和克隆形成能力，而在正常細(xì)胞中用siRNA敲除該基因后，細(xì)胞生長速度則加快。