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文檔簡介
1、目的:對乳鼠竇房結(jié)細胞原代培養(yǎng)的方法進行改進,建立較以往更為優(yōu)化、規(guī)范的培養(yǎng)方法,并對竇房結(jié)自律細胞生物學(xué)特性進行研究,觀察超極化激活門控陽離子通道基因(HCN4)在心臟細胞上的表達特點,為深入了解竇房結(jié)起搏位點的電生理特性提供進一步實驗依據(jù)。
方法:取新生SD乳鼠的竇房結(jié)組織,參照傳統(tǒng)乳鼠竇房結(jié)原代培養(yǎng)方法,并進行優(yōu)化改進,選用混合消化酶:0.1%胰蛋白酶+0.1%Ⅱ型膠原酶等量制成混合液,以減少了竇房結(jié)自律細胞的損傷,經(jīng)混
2、合酶液消化并結(jié)合差速貼壁法和5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-Brdu)純化進行處理。并通過免疫熒光實驗,觀察HCN4在乳鼠心臟細胞上的表達情況。
結(jié)果:采用本方法培養(yǎng)的心臟細胞存活率為95.8%,培養(yǎng)3-5天,視野中絕大多數(shù)為搏動的心臟細胞,可觀察到不規(guī)則形細胞、梭形細胞及三角形細胞,未見成纖維細胞有明顯增殖,其中梭形細胞最多、細胞器不發(fā)達、糖原顆粒不豐富、肌原纖維較少、搏動頻率最快,表達HCN4,三角形細胞微量表達HCN4。
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