2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:AP3B1基因在雌性生殖和子宮發(fā)育中作用的研究
  受社會快速發(fā)展給人們生活環(huán)境帶來的負(fù)面影響,不孕不育的發(fā)病率越來越高,據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測,不孕不育癥將成為21世紀(jì)的第三大疾病,僅次于腫瘤和心腦血管病。在眾多的不孕不育患者中女性子宮發(fā)育不良是主要病因之一,且尚無有效的治療方法。我們的研究發(fā)現(xiàn)pearl(pe)雌鼠存在典型的幼稚子宮現(xiàn)象,可以作為研究子宮發(fā)育不良的動物模型。pe小鼠是AP3B1基因突變引起的HPSⅡ動物模

2、型。HPS是一種常染色體隱性遺傳病,主要的臨床癥狀有肺部纖維化、出血、結(jié)腸炎等,目前在HPSⅡ病人和pe小鼠中尚無生殖能力下降的報道。
  在本部分論文中,我們依次在整體、器官、以及細(xì)胞分子水平對pe小鼠的生殖系統(tǒng)進(jìn)行了全面檢測,并對AP3B1基因?qū)е聀e雌鼠子宮發(fā)育不良的原因進(jìn)行了深入探索。通過大規(guī)模交配實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn):與對照組相比,pe雌鼠的產(chǎn)仔數(shù)顯著降低,受孕幾率略微降低。進(jìn)一步通過對各個年齡段pe雌鼠進(jìn)行器官組織水平分析,

3、我們發(fā)現(xiàn):當(dāng)發(fā)育到一個月時,pe雌鼠開始出現(xiàn)子宮發(fā)育不良的明顯特征,發(fā)育到三個月時pe雌鼠表現(xiàn)出顯著的幼稚子宮的特征;而在幼鼠時這一現(xiàn)象并不明顯。pe雌鼠的卵巢沒有明顯的發(fā)育異常,但其超排卵數(shù)量顯著降低,雌激素含量與B6相比沒有顯著差異。分子蛋白水平分析發(fā)現(xiàn):pe雌鼠的子宮發(fā)育的關(guān)鍵基因Hoxa10、Hoxa11、Wnt5a表達(dá)明顯降低;WesternBlot分析證實(shí)子宮發(fā)育過程重要的通路蛋白β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)量顯著高于B

4、6,在細(xì)胞膜上表達(dá)量顯著低于B6,我們認(rèn)為受AP3B1基因突變影響,β-catenin的運(yùn)輸過程發(fā)生障礙,導(dǎo)致其在細(xì)胞質(zhì)中大量積累。
  綜上所述,pe雌鼠表現(xiàn)出明顯的子宮發(fā)育不良的特征,是研究幼稚子宮的良好的動物模型,AP3B1基因突變引起子宮發(fā)育不良的原因很可能是AP3蛋白復(fù)合體的缺失影響了PCP-2和β-catenin的膜質(zhì)定位,進(jìn)而導(dǎo)致了子宮發(fā)育中重要的調(diào)控通路Wnt和Hox異常。對相關(guān)途徑的深入探究將加深我們對蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)的

5、認(rèn)識,同時可以為臨床不孕不育研究提供新的思路。
  第二部分:CRISPR-CAS9技術(shù)在小鼠基因定點(diǎn)敲除中的應(yīng)用
  對基因組中特定位點(diǎn)進(jìn)行修飾的實(shí)驗(yàn)手段稱為基因組編輯。它在研究基因的功能和基因修復(fù)以及細(xì)胞替代治療上有廣泛的應(yīng)用前景。CRISPR-CAS9技術(shù)作為一門新興的基因修飾方法,憑借其眾多的優(yōu)勢正逐步成為傳統(tǒng)基因編輯方法強(qiáng)有力的替代者。2013年CRISPR-CAS9技術(shù)在小鼠基因定點(diǎn)敲除中得到了前所未有的普及和發(fā)

6、展,本部分論文的目的在于搭建小鼠受精卵顯微注射平臺,并在此基礎(chǔ)上初步探索CRISPR-CAS9技術(shù)在小鼠基因定點(diǎn)敲除中的應(yīng)用。
  小鼠受精卵顯微注射平臺主要由四部分組成,分別為受精卵的收集,受精卵的處理,受精卵的顯微注射和二細(xì)胞期胚胎移植。我們通過大量的重復(fù)實(shí)驗(yàn)針對上述四個步驟摸索了一套合適的實(shí)驗(yàn)條件,包括受精卵消化用的透明質(zhì)酸酶濃度最佳為0.3mg/ml,受精卵收集的時間設(shè)在下午13:00最合適,胚胎移植的假孕雌鼠品系最好用C

7、D1。最終我們胚胎移植的多只CD1雌鼠成功生育,說明顯微注射平臺初步建設(shè)完成。
  為了利用CRISPR-CAS9技術(shù)在我們建設(shè)的顯微注射平臺上進(jìn)行小鼠基因敲除工作,我們選擇了附睪特異基因Teddm1和serpinalf,由于時間關(guān)系,我們完成了上述基因的靶點(diǎn)設(shè)計(jì)工作,后續(xù)的gRNA的構(gòu)建和Cas9RNA的制備工作正在進(jìn)行中。相信在未來CRISPR/Cas技術(shù)會在基因修飾領(lǐng)域得到全面的發(fā)展,并有效地推動基因功能的研究進(jìn)程。

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