蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶2B在肝癌組織中的表達(dá)及對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的調(diào)控作用研究.pdf

1、肝細(xì)胞性肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是一種常見的病死率極高的惡性腫瘤。每年新發(fā)病例及死亡病例約有一半都是在中國(guó)。雖然外科手術(shù)治療的進(jìn)步延長(zhǎng)了部分早期患者的生存期，但多數(shù)患者就診時(shí)已處于晚期，缺乏手術(shù)治療指證，而對(duì)傳統(tǒng)的化療藥物及放療亦不夠敏感。因此，目前亟需解決的問題在于開辟新的研究方向，積極尋找新的有效治療靶點(diǎn)。
　　HCC的發(fā)生是一個(gè)伴有慢性肝損傷的長(zhǎng)期過程，該過程中通常伴隨很多代謝異常，其

2、中就包括S-腺苷蛋氨酸(S-Adenosylmethionine，SAM)。SAM是體內(nèi)重要的蛋氨酸代謝產(chǎn)物和唯一的甲基供體，參與體內(nèi)很多重要的甲基轉(zhuǎn)移過程，其合成和代謝過程都主要發(fā)現(xiàn)在肝臟。近年來腫瘤細(xì)胞代謝和表觀遺傳學(xué)都是熱點(diǎn)，如何逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的異常代謝和甲基化修飾過程也成為新的治療靶點(diǎn)，已有相關(guān)藥物問市。SAM穩(wěn)態(tài)對(duì)維持正常肝細(xì)胞的代謝和甲基化修飾過程都至關(guān)重要，調(diào)節(jié)維持SAM穩(wěn)態(tài)有希望成為不同于傳統(tǒng)化療藥物的肝癌治療新方向。

3、r>　　蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶(Methionine Adenosyltransferase，MAT)是催化形成SAM的關(guān)鍵酶，SAM穩(wěn)態(tài)失衡與MAT類型轉(zhuǎn)換和活性降低有關(guān)。MAT2B基因?qū)儆贛AT家族成員之一，編碼產(chǎn)生β調(diào)節(jié)亞基，通過降低SAM的Ki值和蛋氨酸的Km值來調(diào)控MATⅡ的活性，從而影響體內(nèi)SAM含量。正常肝細(xì)胞中該基因表達(dá)量極低，但是當(dāng)肝臟發(fā)生慢性病變或者癌變時(shí)其表達(dá)明顯上調(diào)，從而影響體內(nèi)SAM穩(wěn)態(tài)，并參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡

4、等過程。更為重要的是，我們前期研究還發(fā)現(xiàn)在小鼠體內(nèi)將轉(zhuǎn)座子插入該基因后，MAT2B蛋白表達(dá)上調(diào)，最終引發(fā)HCC的產(chǎn)生。
　　本研究希望通過體內(nèi)體外多層次實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討和闡明MAT2B在HCC進(jìn)展中的作用，包括在細(xì)胞水平對(duì)細(xì)胞增殖和遷移的影響，以及在動(dòng)物模型中對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響以及與臨床肝癌患者預(yù)后關(guān)系。主要結(jié)果如下:
　　1.MAT2B蛋白在肝癌組織中與癌旁組織相比表達(dá)量明顯上調(diào)，并且與腫瘤大小和患者臨床預(yù)后有顯著關(guān)系。

5、>　　2.CCK-8、結(jié)晶紫染色發(fā)現(xiàn)干擾MAT2B能明顯抑制HepG2、HCCLM6細(xì)胞的增殖作用，流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)周期發(fā)現(xiàn)干擾組出現(xiàn)明顯的S-期積聚，裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步證實(shí)了下調(diào)MAT2B在體內(nèi)也能明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)，Western-Blot發(fā)現(xiàn)抑制增殖作用可能與p-AKT、p-p38MAPK表達(dá)下調(diào)及p21、p27積聚有關(guān)。
　　3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell發(fā)現(xiàn)干擾MAT2B能顯著抑制HepG2、HCCLM6細(xì)胞的遷