日本血吸蟲(chóng)肝期童蟲(chóng)表膜結(jié)合多肽的篩選與初步鑒定.pdf

1、目的：從噬菌體十二肽庫(kù)中篩選出與日本血吸蟲(chóng)(Schistosoma japonicum,Sj)童蟲(chóng)表膜特異性結(jié)合的多肽，為研究血吸蟲(chóng)病的治療提供靶向分子。
　　 方法：利用噬菌體十二肽庫(kù)與Sj活童蟲(chóng)靶分子之間的親和力結(jié)合，經(jīng)過(guò)三輪吸附-洗脫-擴(kuò)增的篩選過(guò)程，從末次回收的結(jié)合噬菌體中隨機(jī)挑取20個(gè)陽(yáng)性克隆，首先對(duì)其進(jìn)行測(cè)序；隨后利用免疫組化、Western blot分析等方法觀察目標(biāo)噬菌體在體外與童蟲(chóng)表膜的結(jié)合能力，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2、將目標(biāo)噬菌體回輸?shù)揭迅腥狙x(chóng)的動(dòng)物體內(nèi)，分別回收肝臟和血吸蟲(chóng)童蟲(chóng)，分別洗脫與肝臟和童蟲(chóng)結(jié)合的噬菌體，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，驗(yàn)證其靶向性。
　　 結(jié)果：經(jīng)3輪篩選后，噬菌體回收率從第1輪的0.77×10－8增加到第3輪的0.75×10－5，說(shuō)明噬菌體得到了有效富集。DNA測(cè)序后發(fā)現(xiàn)，20個(gè)陽(yáng)性噬菌體克隆中的15個(gè)克隆的插入序列均為QSFASLTNPRVL，將這些噬菌體克隆命名為ZW-15。免疫組化、Western blot均顯示ZW-

3、15噬菌體的該插入序列能與Sj童蟲(chóng)表膜有效結(jié)合。體內(nèi)回輸試驗(yàn)比較ZW-15及M13KE空載噬菌體的回收量，兩者從單位重量蟲(chóng)體中的回收量差異顯著(P1＜0.01)，而兩者從單位重量肝臟中的回收量差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P2＞0.05)，證實(shí)該ZW-15噬菌體的插入序列短肽能有效地靶向結(jié)合于體內(nèi)Sj童蟲(chóng)表膜。
　　 結(jié)論：本研究篩選獲得陽(yáng)性噬菌體克隆ZW-15所展示的短肽QSFASLTNPRVL能有效地靶向結(jié)合Sj童蟲(chóng)表膜，將為進(jìn)一步研究