美洲型豬繁殖與呼吸綜合征兩種檢測方法的建立和初步應用.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸征病毒(PRRSV)引起的妊娠母豬、公豬生殖障礙及仔豬呼吸障礙為特征的疾病，是嚴重危害世界養(yǎng)豬業(yè)的疾病之一。其病原PRRSV可分為美洲型和歐洲型，我國分離的PRRSV大多數為美洲型。本研究分別建立了美洲型的病原學和血清學的診斷方法。 參照美洲型PRRSVM基因序列，設計引物和探針，建立熒光RT-PCR檢測方法，用于該型病毒的檢測。對梯度稀釋的陽性對照的檢測可知所建立的熒光RT-PCR

2、方法的敏感性比普通RT-PCR高103～104倍。用該方法檢測從病毒液中提取的RNA，可以推測出最低可檢測到1TCID50。并用此法檢測豬瘟病毒、乙腦病毒、偽狂犬病毒、馬動脈炎病毒、圓環(huán)病毒Ⅱ型和MARC145細胞的RNA，結果均為陰性。對126份臨床樣品進行了檢測應用，檢測結果(7份陽性，119份陰性)與病毒分離完全符合。本研究建立的檢測方法以體外轉錄的dsRNA為陽性對照，具有高度的穩(wěn)定性，解決了類似檢測方法中RNA陽性對照易降解的

3、難題。 在現有的單克隆抗體1G10的基礎上，通過各種條件的摸索和優(yōu)化，初步建立起單抗捕捉ELISA檢測美洲型豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體的方法。該方法的單抗最佳包被濃度為2.64μg/ml，病毒最佳稀釋度為17.51μg/ml。用該方法檢測標準豬瘟病毒陽性血清、豬細小病毒陽性血清、豬布氏桿菌陽性血清、豬乙腦病毒陽性血清以及豬偽狂犬病毒陽性血清，結果均為陰性。在檢測攻毒豬的血清試驗中，得知該方法的敏感性為19/22與IDEXX試劑盒