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文檔簡介
1、本研究的目的是構(gòu)建亞洲Ⅰ型(AsiaⅠ)口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus，F(xiàn)MDV)VP1基因的重組犬Ⅱ型腺病毒，并對其表達蛋白的免疫原性進行檢測，為重組活載體疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。 根椐測序結(jié)果，設(shè)計一對引物，利用PCR技術(shù)，從含有YN株亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒P1基因的pTeasy質(zhì)粒中擴增出VP1基因，繼而構(gòu)建出真核表達載體PVAX-VP1。再將含有巨細胞啟動子CMV的目的基因表達盒連接到穿梭載體p
2、VAX△E3上，篩選出VP1表達盒方向與E3區(qū)轉(zhuǎn)錄方向一致的重組子，獲得轉(zhuǎn)移載體。再經(jīng)酶切、連接等方法獲得重組腺病毒質(zhì)粒。利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DK細胞，轉(zhuǎn)染三次后，細胞出現(xiàn)明顯的腺病毒病變。經(jīng)PCR擴增、測序檢測及基因組酶切鑒定，證明該病毒即為重組犬Ⅱ型腺病毒。命名為CAV2/FMDV。經(jīng)驗證，該重組毒可穩(wěn)定遺傳，其毒價為103.5TCID50/ml。經(jīng)Western-blotting檢驗，證明該表達產(chǎn)物具有抗原活性。本實驗成功
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