PAMAM-D納米微球介導(dǎo)hTERT siRNA靶向治療口腔鱗癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、Y767906p婁號(hào)R7390UD(1616j11岔m：般％00211121024咿幽撼毋博士學(xué)位論文PAMAMD蚋米微球介導(dǎo)hTERTsiRNA靶向治療口腔鱗癌的實(shí)驗(yàn)研究學(xué)位申請(qǐng)^：一#”0a職稱(chēng)業(yè)0稱(chēng)劉習(xí)強(qiáng)黃洪童教授腫指學(xué)(polyamidoaminedendrimer，PAMAMD)納米微球介導(dǎo)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhancedgreenfluorescentproteinEGFP)基因轉(zhuǎn)染人舌鱗癌細(xì)胞優(yōu)化轉(zhuǎn)染方案：在此基礎(chǔ)上，

2、嘗試以hTERT基因?yàn)榘悬c(diǎn)，利用目前較為先進(jìn)的RNA干擾(RNAinterferenceRNAi)技術(shù)構(gòu)建多條靶向hTERT基因的小干擾RNA(smallinterferingRNAsiRNA)表達(dá)框架(siRNAexpressioncassettesSECs)，并利用PAMAMD納米載體在優(yōu)化條件下篩選出最有效的siRNA靶序列；進(jìn)一步構(gòu)建siRNA表達(dá)載體進(jìn)行體內(nèi)外系列實(shí)驗(yàn)并對(duì)hTERT表達(dá)調(diào)控及基因沉默誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制進(jìn)行初步探討

3、，旨在探索將RNAi和納米基因轉(zhuǎn)移技術(shù)有機(jī)結(jié)合治療舌鱗癌的可行性，從而為口腔癌以及其他腫瘤的治療提供新途徑。第一部分PAMAMD納米載體表征及其轉(zhuǎn)染效率影響因素的分析選擇合適的基因轉(zhuǎn)移載體將目的基因安全高效地導(dǎo)入細(xì)胞，是基因治療成功的關(guān)鍵。從目前發(fā)展趨勢(shì)來(lái)看，陽(yáng)離子聚合物載體在基因轉(zhuǎn)移方面呈現(xiàn)顯著優(yōu)勢(shì)，其中PAMAMD納米載體以其優(yōu)越的理化性能和較理想的基因轉(zhuǎn)移能力而日益受到重視。研究證明，PAMAMD可以高效介導(dǎo)基因和／或藥物轉(zhuǎn)染多種

4、腫瘤細(xì)胞株和原代培養(yǎng)細(xì)胞，并且具有緩釋、安全無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)。由于受多種條件參數(shù)的影響，PAMAMD的最佳轉(zhuǎn)染效率在不同類(lèi)型細(xì)胞中差異較大。本研究利用增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)真核表達(dá)質(zhì)粒作為報(bào)告基因，選擇第二、第五和熱降解型PAMAMD(SuperFect)作為基因轉(zhuǎn)移載體，并以脂質(zhì)體LipofectamineTM2000為對(duì)照制冬轉(zhuǎn)染復(fù)合物。應(yīng)用透射電鏡、動(dòng)態(tài)激光散射和電位分析儀等測(cè)定各載體表征；抗核酸酶試驗(yàn)檢測(cè)載體對(duì)基因的保護(hù)能力；