脂質(zhì)體轉染survivin反義寡核苷酸對人胰腺癌細胞凋亡的影響.pdf

1、廣西醫(yī)科大學碩士學位論文脂質(zhì)體轉染survivin反義寡核苷酸對人胰腺癌細胞凋亡的影響姓名：劉海威申請學位級別：碩士專業(yè)：普通外科指導教師：劉志明200905013轉染所用的脂質(zhì)體量2u1、3ul、4u1時，熒光細胞百分率分別為588％、34O％和236％；4SurvivinASODN轉染后熒光顯微鏡觀察轉染后細胞排列松散，細胞之間空隙加大，形態(tài)變圓，胞漿中顆粒較多，貼壁細胞生長較少，部分漂浮于培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液因此變得較混濁，且隨著轉染

2、濃度的增加變化更明顯；5MTT法結果顯示：200noml／L的ASODN作用于胰腺癌PANC—l細胞24h、36h、48h后細胞抑制率分別為3067％、4267％、613％，隨著時間延長，細胞抑制率增高，分別作用24、36、48d時后各對照組之間均無統(tǒng)計學差異(尸005)；6DNA凝膠電泳觀察：在電泳圖上呈明顯的“梯狀”條帶，而正義組、脂質(zhì)體空轉染組和空白對照組則沒有；7吖叮橙(AO)與溴化乙啶(EB)染色觀察PANC一1細胞凋亡的形態(tài)

3、學改變：細胞凋亡時，細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)可見致密濃染的黃綠色染色，其核染色質(zhì)均高度聚集、斷裂或核染色呈新月形聚集于核膜一邊，核固縮與斷裂，核仁消失；細胞壞死時，細胞質(zhì)內(nèi)黃綠色或桔黃色熒光均可減弱或消失，紅色熒光增強；8survivinASODN處理組PANC一1細胞24h后凋亡率為381％，正義寡核苷酸(SODN)組為416％。細胞周期阻滯于G：／M期；9采用免疫組織化學和圖像分析半定量法，觀察轉染后各組survivin蛋白表達的平均灰度值