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1、目的:探討Smad7反義寡核苷酸在防治潰瘍性結(jié)腸炎中的作用及其發(fā)生機(jī)制。 方法: 1.動(dòng)物模型的建立:將小鼠分為三組,分別為實(shí)驗(yàn)組、治療組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組給予惡唑酮灌腸制作潰瘍性結(jié)腸炎模型;治療組聯(lián)合應(yīng)用惡唑酮和Smad7反義寡核苷酸灌腸;對(duì)照組則正常喂養(yǎng),不采取任何措施。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死全部小鼠,取結(jié)腸段用10%中性多聚甲醛固定,石蠟包埋,待檢;同時(shí)留取部分結(jié)腸組織-80℃保存。 2.實(shí)驗(yàn)研究:(1) 蘇木精
2、-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察小鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)學(xué)變化;(2) 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)用藥后Smad7、Smad4、TGF.βR I和TGF-βR II蛋白在結(jié)腸細(xì)胞中的表達(dá);(3) Western blot法檢測(cè)Smad7、SmM4、TGF-βR I和TGF-βRII在結(jié)腸細(xì)胞中的表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.末小鼠一般情況:實(shí)驗(yàn)組和治療組小鼠均于灌腸24h后出現(xiàn)厭食、懶動(dòng)和稀便;以后,實(shí)驗(yàn)組小鼠相繼出現(xiàn)便血或者大便隱血陽(yáng)性
3、(聯(lián)苯胺法),治療組小鼠則無(wú)便血,偶有大便隱血陽(yáng)性;兩組小鼠均有體重下降,但實(shí)驗(yàn)組小鼠體重下降更明顯,與治療組相比差異顯著(p<0.05);對(duì)照組小鼠則無(wú)任何異常反應(yīng),體重增加。 2.小鼠結(jié)腸粘膜大體形態(tài)觀察:對(duì)照組小鼠結(jié)腸黏膜無(wú)水腫、糜爛及潰瘍形成,偶見遠(yuǎn)端黏膜輕度充血,平均評(píng)分值為0.167±0.408;實(shí)驗(yàn)組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸黏膜明顯充血水腫,可見較多小潰瘍,病變連續(xù)存在,平均評(píng)分值為3.667±0816,與對(duì)照組比較差異顯著(
4、p<0.05);治療組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸黏膜亦有充血水腫,程度較輕,潰瘍較少且面積較小,平均評(píng)分值為1.000±1.095,與實(shí)驗(yàn)組相比評(píng)分下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 3.免疫組織化學(xué)方法染色結(jié)果顯示,小鼠結(jié)腸粘膜組織中實(shí)驗(yàn)組Smad7的陽(yáng)性表達(dá)增加,陽(yáng)性率為81.0±4.64%,與對(duì)照組(15.7±5.68%)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),治療組的陽(yáng)性表達(dá)(37.7±4.52%)與實(shí)驗(yàn)組相比明顯減少(p<0.0
5、5);而Smad4、TGF-βRⅡ的陽(yáng)性表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組減少,陽(yáng)性率分別為32.7±4.37%、30.4±4.01%,與對(duì)照組比較差異同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),在治療組中兩者的表達(dá)增加,分別為42.8±4.95%、47.1±4.10%,與實(shí)驗(yàn)組比較差異顯著(p<0.05)。 4.Western blot檢測(cè):在實(shí)驗(yàn)組小鼠結(jié)腸組織中Smad7的表達(dá)量為4.96±0.67,顯著高于對(duì)照組(2.68±1.28),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)
6、學(xué)意義(p<0.05),而治療組的表達(dá)量為2.77±0.96,顯著低于實(shí)驗(yàn)組(p<0.05);Smad4在實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)量為0.96±0.14,顯著低于對(duì)照組(1.18±0.17),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),在治療組中表達(dá)量為1.39±0.19,顯著高于實(shí)驗(yàn)組(p<0.05);TGF-βRⅡ在實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)量為0.65±0.15,顯著低于對(duì)照組(0.95±0.06),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),在治療組中TGF-βRⅡ的表達(dá)增
7、加(1.10±0.14),與實(shí)驗(yàn)組比較顯著上調(diào)(p<0.05);TGF-βRⅠ在對(duì)照組中的表達(dá)量為0.73±0.38,實(shí)驗(yàn)組和治療組中的表達(dá)量分別為1.17±0.25,和0.80±0.13,三組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 結(jié)論: 1.應(yīng)用惡唑酮成功制作了小鼠UC模型。 2.Smad7反義寡核苷酸能有效防治惡唑酮誘發(fā)的UC,為其進(jìn)一步用于UC的防治提供了理論依據(jù)。 3.UC小鼠結(jié)腸組織中存在T
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