信號(hào)肽和IL-4增強(qiáng)基于HEV中和表位（p179）基因疫苗誘導(dǎo)抗體應(yīng)答的研究.pdf

1、戊型肝炎病毒(Fepatitis Evirus,FtEV)是無包膜的單正鏈RNA病毒，主要通過胃腸道傳播，是引發(fā)急性戊型肝炎(Hepatitis E，HE)的病原體。目前HE尚無特效的抗病毒治療藥物，因此，HEV疫苗在HE防治中的作用受到人們的重視，而誘導(dǎo)具有保護(hù)作用的中和抗體是HEV疫苗的關(guān)鍵。在以往的研究中，我們利用His融合靶抗原的原核表達(dá)技術(shù)、抗原mapping技術(shù)和基于PCR的體外中和試驗(yàn)等發(fā)現(xiàn)，HEV中和抗原表位位于ORF2

2、編碼蛋白的第452至617位氨基酸之間，這為研制基于中和表位的HEV疫苗奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。 基因疫苗因其具有制備簡(jiǎn)單、性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)濟(jì)以及由體內(nèi)真核細(xì)胞表達(dá)的靶抗原具有與天然病毒抗原相似的構(gòu)象結(jié)構(gòu)等優(yōu)點(diǎn)，而受人們關(guān)注并已用于HEV疫苗的研究。為進(jìn)行基于HEV中和表位基因疫苗的研究，我們?cè)サ粼璸166 N端His-tag并構(gòu)建p166編碼基因的真核表達(dá)載體，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：這些真核表達(dá)載體不能有效表達(dá)p166多肽、也很難在小鼠體

3、內(nèi)誘導(dǎo)明顯的抗體應(yīng)答。為此，我們又以p166為基礎(chǔ)重新進(jìn)行了抗原mapping試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)：不同的表達(dá)載體以及目的基因的長短直接影響靶抗原在體內(nèi)、體外的表達(dá)，最終我們成功發(fā)現(xiàn)了能在真核細(xì)胞有效表達(dá)的、最短的、含中和抗原表位的p166的同源序列多肽-p179(位于ORF2編碼蛋白第439-617位氨基酸)。 在本研究中，我們以pVAX為真核表達(dá)載體、HEV-ORF2<'439-617>(p179)為靶基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，以肌肉