可控性樹突狀細(xì)胞活疫苗誘導(dǎo)抗卵巢癌免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、9 5 5 0 2 ：i後旦大學(xué)學(xué)校代碼1 0 2 4 6學(xué) 號：0 3 1 1 0 8 1 9 1博士學(xué)位論文誘導(dǎo)抗卵巢癌免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究院專姓系：業(yè)：名：指導(dǎo)教師：婦產(chǎn)科醫(yī)院婦產(chǎn)科學(xué)康 玉徐從劍教授完成日期： 蘭Q Q 墮生! 旦! 旦復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文 可控性樹突狀細(xì)胞活疫苗誘導(dǎo)抗卵巢癌免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究 中文摘要第二部分 可控性樹突狀細(xì)胞活疫苗誘導(dǎo)抗卵巢癌免疫保護(hù)和免疫治療作用目的：研究可控性D C 活疫苗誘導(dǎo)抗卵巢癌免疫保

2、護(hù)和免疫治療作用。方法：1 ．乳酸脫氫酶釋放法檢測經(jīng)過活疫苗免疫的大鼠脾細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞( C T L ) 對N u T u 一1 9 細(xì)胞的殺傷作用。2 ．在體內(nèi)免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)大鼠分為活疫苗組、活疫苗+ 羥甲基無環(huán)鳥苷( 6 C V ) 組、死疫苗組、單用G C V 組矛n P B S 對照組。各組大鼠分別經(jīng)二次免疫后，給予N u T u 一1 9 細(xì)胞攻擊。一周后，活疫苗+ 6 C V 組和單用6 C V 組再予腹腔注射6

3、 C V 。N u T u 一1 9 細(xì)胞攻擊后9 0 天終止實(shí)驗(yàn)。觀察腫瘤出現(xiàn)時間、腫瘤大小。分別計算實(shí)驗(yàn)各組抑瘤率、病理形態(tài)學(xué)檢測、流式細(xì)胞儀檢測各腫瘤組織的細(xì)胞凋亡情況。3 ．在體內(nèi)的免疫治療實(shí)驗(yàn)中，每只大鼠先皮下接種N u T u 一1 9細(xì)胞，一周后將荷瘤大鼠分組，分別給予二次活疫苗、活疫苗+ 6 C V 、死疫苗、單用6 C V 或P B S 處理。接種N u T u 一1 9 細(xì)胞后9 0 天終止實(shí)驗(yàn)。觀察腫瘤形成及腫瘤大

4、小，取瘤稱重并作光鏡及流式細(xì)胞儀檢測。結(jié)果：1 ．經(jīng)活疫苗免疫的大鼠脾C T L 對N u T u 一1 9 細(xì)胞的殺傷活性L k , P B S 對照組顯著增高( P < O ．0 1 ) ，并強(qiáng)于經(jīng)死疫苗免疫者∽< 0 ．0 5 ) 。2 ．免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與P B S 對照組相比，經(jīng)活疫苗免疫后大鼠的腫瘤發(fā)生率降低；成瘤時間延遲；腫瘤體積縮小( P < O ．0 1 ) ，其作用強(qiáng)于死疫苗組( P <

5、 O ．0 5 ) ?；钜呙缃M抑瘤率可達(dá)8 3 ．0 2 ％，而死疫苗組僅2 5 ．4 7 ％，差異有顯著性意義( P < O ．0 1 ) ?；钜呙缃M腫瘤組織有大片壞死灶及大量淋巴細(xì)胞浸潤；腫瘤組織的凋亡率明顯高于對照組( P < O ．0 5 ) 。3 ．免疫治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與P B S 對照組相比，活疫苗治療組大鼠的平均腫瘤體積明顯縮小( P < O ．0 1 ) ?；钜呙缃M抑瘤率可達(dá)8 6 ．2 4 ％，而死

6、疫苗組僅3 4 ．3 9 ％，差異有顯著性意義( P < O ．0 1 ) ?；钜呙缃M腫瘤組織出現(xiàn)大片狀壞死樣結(jié)構(gòu)及團(tuán)簇樣淋巴細(xì)胞浸潤；腫瘤組織的凋亡率明顯高于對照組( P < O ．0 5 ) 。結(jié)論：與死疫苗相比，卵巢癌／D C 活疫苗能顯著提高大鼠C T L 殺傷活性，誘導(dǎo)更強(qiáng)的抗卵巢癌免疫保護(hù)和免疫治療作用。第三部分可控性樹突狀細(xì)胞活疫苗的安全性研究目的：研究可控性D c 活疫苗在體內(nèi)外被滅活的可行性。方法：1 ．在

7、體外實(shí)驗(yàn)中，以M T T 法檢測6 C V 對活疫苗的殺傷作用；以流式細(xì)胞儀和H o e c h s t 染色法檢測6 C V 作用7 天后活疫苗的凋亡現(xiàn)象。2 ．在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，大鼠經(jīng)足墊皮下接種活疫苗后分為兩組：活疫苗+ 6 C V 組大鼠再予6 C V 腹腔注射7 天；活疫苗+ 生理鹽水組作為對照組。接種活疫苗后觀察9 0 天，記錄注射部位有無腫瘤形成及各臟器的腫瘤轉(zhuǎn)移情況。3 ．將活疫苗以熒光染料標(biāo)記后進(jìn)行大鼠體內(nèi)示蹤，一組大鼠再