VEGF-D在淋巴管生成及乳腺癌淋巴結轉移中作用的研究.pdf

1、目的： 本研究通過觀察VEGF-D在乳腺癌組織中的表達以及對體外培養(yǎng)人淋巴管內(nèi)皮細胞增殖的影響，探討其與乳腺癌淋巴道轉移的關系以及可能的作用機制，同時比較VEGF-D與VEGF-C在乳腺癌淋巴管生成和淋巴道轉移中的作用。 材料與方法： 1.收集臨床手術切除、石蠟包埋的乳腺癌標本112例、癌前病變標本12例、正常乳腺組織標本10例，制成5μm厚連續(xù)切片，進行免疫組織化學染色(SP法)，觀察乳腺癌組織中VEGF-D、

2、VEGF-C、LYVE-1、CD31的表達情況，并與臨床病理因素進行對比分析。染色結果用SPSS11.0軟件包統(tǒng)計。 2.112例乳腺癌標本中8例同時取其術后新鮮組織，采用RT-PCR方法檢測乳腺癌組織中VEGF-DmRNA的表達情況。 3.體外培養(yǎng)人淋巴管內(nèi)皮細胞。取生長活力最旺盛的第3代細胞，調整細胞數(shù)為2×104/ml，加入96孔培養(yǎng)板，每孔100μl。實驗分4組，每組6孔。細胞生長24h后，每孔各加入以下試劑10

3、0μl/孔。第1組為對照組：ECM；第2組：ECM+rhVEGF-D；第3組：ECM+rhVEGF-C；第4組：ECM+rhVEGF-D+rhVEGF-C。72h后每孔加入MTT，繼續(xù)孵育4h，酶標儀490nm波長下測量每孔吸光度A值。以空白孔調零。實驗重復進行3次。計算細胞增殖率，比較各組細胞增殖情況。 結果： 1.112例乳腺癌中有VEGF-D蛋白表達者85例(75.9％)，12例癌前病變中有VEGF-D蛋白表達4例

4、(30.0％)，10例正常乳腺組織中則未檢測到VEGF-D蛋白表達。VEGF-D蛋白在正常組織、癌前病變和腫瘤組織的表達依次增加，差異具有統(tǒng)計學意義(兩兩比較p＜0.05)。隨著腫瘤大小、組織學分級的增加，VEGF-D蛋白表達亦相應增加，但VEGF-D蛋白表達與年齡因素無顯著相關。 2.112例乳腺癌中有VEGF-C蛋白表達者93例(83.0％)，高于VEGF-D蛋白的表達(75.9％)(p＜0.05)。淋巴結轉移率在VEGF-

5、C單獨表達組(7/13，53.8％)高于VEGF-D單獨表達組(2/5，40.0％)(p＜0.05)。 3.112例乳腺癌組織中，VEGF-D與VEGF-C同時表達者80例，同時無表達者14例，另有13例VEGF-C表達而VEGF-D不表達，5例VEGF-D表達而VEGF-C不表達。淋巴結轉移率在VEGF-D與VEGF-C同時表達組明顯高于二者單獨表達組或同時不表達組(p＜0.05)。 4.VEGF-D陽性指數(shù)在淋巴結轉

6、移組(60.42±16.26)明顯高于未轉移組(41.82±15.93)(p＜0.05)。VEGF-C陽性指數(shù)在淋巴結轉移組(62.37±16.75)明顯高于未轉移組(43.56±15.64)(p＜0.05)。 5.乳腺癌組織淋巴管密度與VEGF-D、VEGF-C蛋白表達強度成正相關，隨著VEGF-D、VEGF-C蛋白表達強度的增加，淋巴管密度也增加(前者r=0.864，p＜0.05；后者r=0.870，p＜0.05)。乳腺癌組

7、織中淋巴管密度在VEGF-D、VEGF-C同時表達組顯著高于二者單獨表達組或同時不表達組。 6.乳腺癌組織淋巴管密度在淋巴結轉移組(13.72±7.74)明顯高于未轉移組(7.69±5.85)(p＜0.05)。 7.培養(yǎng)的人淋巴管內(nèi)皮細胞在加入rhVEGF-D、rhVEGF-C后均增殖活躍。培養(yǎng)72h后rhVEGF-D組增殖率為(53.8±7.07)％，rhVEGF-C組增殖率為(61.9±6.65)％，rhVEGF-D

8、+VEGF-C組增殖率為(76.1±5.08)％，均與對照組有顯著差別(p＜0.05)，各實驗組間細胞增殖率均有明顯差別(兩兩比較p＜0.05)。 結論： 1.VEGF-D蛋白在乳腺癌組織中呈高表達，其表達強度與乳腺癌腫瘤大小、組織學分級密切相關，提示VEGF-D的高表達在乳腺癌進展過程中起重要作用。 2.VEGF-D蛋白表達強度與乳腺癌組織淋巴管密度及淋巴結轉移密切相關，體外細胞培養(yǎng)證明rhVEGF-D可促進人

9、淋巴管內(nèi)皮細胞增殖，提示VEGF-D可通過促進淋巴管生成而促進乳腺癌的淋巴道轉移。 3.VEGF-D蛋白在乳腺癌組織中的表達率及其與乳腺癌淋巴管生成和淋巴結轉移相關性均小于VEGF-C，提示VEGF-C在乳腺癌組織中促進淋巴管生成和淋巴道轉移的作用更強。 4.體外細胞培養(yǎng)證實，同時加入rhVEGF-D、rhVEGF-C的人淋巴管內(nèi)皮細胞的增殖率明顯高于單獨加入rhVEGF-D或rhVEGF-C組，免疫組化也顯示VEGF-