熊果酸在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、熊果酸(Ursolicacid,UA),屬于α-香樹脂醇(α-amyrin)型五環(huán)三萜類化合物,為許多中藥復(fù)方的主要有效成分之一。據(jù)不完統(tǒng)計(jì),在自然界已有34科108種植物中分離得到熊果酸。主要分布在女貞子、山楂、陸英、夏枯草、車前草、白花蛇舌草、連翹和苦丁茶等藥用植物中,以游離形式或結(jié)合成糖苷存在。目前,從植物中提取熊果酸的技術(shù)已相當(dāng)成熟,熊果酸原料的生產(chǎn)已商業(yè)化,且價(jià)格便宜,容易取得,國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上已有純度達(dá)95％的熊果酸原粉出售。所以

2、如果可以把熊果酸開發(fā)成為單體藥將會(huì)有很好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
　　但是創(chuàng)新藥物的開發(fā)是一個(gè)周期長(zhǎng),消耗大,風(fēng)險(xiǎn)高的過程,并且淘汰率很高,據(jù)統(tǒng)計(jì),在已進(jìn)行臨床試驗(yàn)的候選化合物中,只有10%的化合物能成為藥物最終上市。其中40%的化合物是因?yàn)樗巹?dòng)學(xué)方面的原因而被終止臨床試驗(yàn)。如果候選化合物在進(jìn)入臨床之前,能夠借助于已經(jīng)取得的動(dòng)物試驗(yàn)和體外試驗(yàn)的數(shù)據(jù)對(duì)人體的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行預(yù)測(cè),明確其主要藥動(dòng)學(xué)特性,認(rèn)為該化合物的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)合適后再進(jìn)入

3、臨床試驗(yàn)階段,將會(huì)大大提高新藥篩選的效率,消除盲目性,節(jié)約時(shí)間和成本。
　　藥代動(dòng)力學(xué)中體內(nèi)代謝法的難點(diǎn)是藥物及其代謝產(chǎn)物在體內(nèi)的濃度都比較低,檢測(cè)具有一定的難度。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC/MS)的出現(xiàn)在一定程度上解決了這個(gè)問題,集液相色譜(LC)的高分離能力和質(zhì)譜(MS)的高靈敏度、極強(qiáng)的定性專屬性于一體的色譜技術(shù),已成為藥物代謝研究中不能替代的一種強(qiáng)有力的分離分析工具。
　　本文即建立了一個(gè)高靈敏度和選擇性的UPLC-

4、MS/MS方法對(duì)UA在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行分析研究,為熊果酸的進(jìn)一步研究提供非臨床藥代動(dòng)力學(xué)支持。
　　第一部分UA在大鼠體內(nèi)的吸收UPLC-MS/MS條件為:
　　WatersACQUITYUPLC,AgilentC18色譜柱(50mm×2.1mm,1.8μm);流動(dòng)相:乙腈-水(90:10),流速0.2ml/min,柱溫30℃;
　　QuattroPremierXELC/MS/MS檢測(cè)器;
　　離子化方式

5、:電噴霧離子化(ESI);
　　檢測(cè)模式:多反應(yīng)檢測(cè)(MRM);
　　錐孔電壓,碰撞能量和離子選擇如下所示離子通道錐孔電壓碰撞能量UA:455.40>407.4070.035.0IS:469.40>355.0070.053.0
　　樣品處理方法為乙腈直接萃取,經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證在該提取方法下最低定量限為10ng/ml,精密度高中低RSD值日內(nèi)分別為6.06%,7.60%,6.60%;日間分別為3.43%,5.46%,3.89

6、%。三種濃度的提取回收率均大于80%,其相對(duì)偏差均小于10%。
　　大鼠分別灌胃給予熊果酸50mg/kg,100mg/kg,300mg/kg后于0min、10min、20min、40min、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、10h、12h和24h毛細(xì)管眼眶后靜脈叢取血,按所建方法分析,根據(jù)隨行標(biāo)曲回歸計(jì)算濃度得出濃度-時(shí)間曲線,用DAS,2.0軟件處理得出主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),結(jié)果表明,UA在大鼠體內(nèi)吸收符合二室模型但是個(gè)體吸

7、收差異較大,因?yàn)槲涨€擬合度不夠好,所以我們以統(tǒng)計(jì)矩計(jì)算為準(zhǔn)。
　　第二部分UA在大鼠體內(nèi)的分布
　　色譜條件由于組織基質(zhì)干擾比較嚴(yán)重,處理方法改變?yōu)槁确螺腿〗M織勻漿,吹干用流動(dòng)相定容進(jìn)樣,同時(shí)離子化模式使用比較穩(wěn)定的大氣壓電離(APCI),但是系統(tǒng)適應(yīng)性仍然無(wú)法達(dá)到要求,有待進(jìn)一步研究?jī)?yōu)化。
　　雖然整個(gè)試驗(yàn)沒有達(dá)到完整的對(duì)UA在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行全面研究的目標(biāo),但是積累了一定的經(jīng)驗(yàn),吸收部分為以后的研究提供