結(jié)核分枝桿菌耐利福平rpoB基因突變的分析與檢測(cè).pdf

1、目的：探討結(jié)核分枝桿菌耐藥基因rpoB突變與利福平耐藥性的關(guān)系，利用核酸導(dǎo)流雜交技術(shù)快速檢測(cè)rpoB基因突變。方法：收集81例結(jié)核分枝桿菌臨床分離株，PCR擴(kuò)增rpoB含利福平耐藥決定區(qū)域在內(nèi)的基因片段，對(duì)全部81例標(biāo)本的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析并與利福平藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，選取包括20例測(cè)序存在突變的標(biāo)本和11例測(cè)序?yàn)橐吧偷臉?biāo)本在內(nèi)的共31例標(biāo)本進(jìn)行導(dǎo)流雜交，結(jié)果與測(cè)序結(jié)果進(jìn)行對(duì)照，用TA克隆產(chǎn)物做陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果：81例結(jié)核分枝

2、桿菌臨床分離株中，27例耐利福平菌株中20株發(fā)生rpoB基因突變（74.1％），突變位點(diǎn)包括531和526在內(nèi)的7個(gè)位點(diǎn)10種突變類型，并發(fā)現(xiàn)新的突變位點(diǎn)和突變形式，目前已被美國(guó)GeneBank收錄；54株敏感株中，1株發(fā)生突變（1.9％）。31例標(biāo)本的導(dǎo)流雜交與測(cè)序結(jié)果對(duì)比顯示，14株雜交為野生型，測(cè)序發(fā)現(xiàn)3株存在突變，17株雜交存在突變，測(cè)序結(jié)果與之吻合，敏感度為85％，特異性為100％，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為100％，陰性預(yù)測(cè)值為78.6％