microRNA-375對胃癌生物學(xué)作用的影響.pdf

1、目的：探討miR-375對胃癌生物學(xué)作用的影響。
　　方法:將已構(gòu)建好的miR-375的真核表達(dá)載體及其空載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入人胃癌 HGC-27細(xì)胞，篩選并建立高表達(dá)miR-375的胃癌細(xì)胞系 PC3.1-375。通過 CCK-8法及流式細(xì)胞檢測法檢測高表達(dá)miR-375對人胃癌細(xì)胞 HGC-27的增殖、凋亡的影響，Western blotting檢測 AEG-1蛋白的變化并建立HGC-27胃癌細(xì)胞裸鼠皮下種植瘤模型，研究miR-37

2、5對裸鼠種植瘤的生長抑制作用，免疫組化法檢測瘤組織內(nèi)AEG-1的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及經(jīng)過細(xì)胞篩選后實(shí)時定量PCR檢測PC3.1-375組、空白對照組HGC和空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組PC3.1相比，PC3.1-375組HGC-27細(xì)胞的miR-375的表達(dá)量明顯上升（P<0.05）， HGC組和PC3.1組之間相比無明顯差異（P>0.05）；CCK-8法繪制細(xì)胞生長曲線，PC3.1組與HGC組間生長曲線差異無顯著性(P>0.05)

3、，PC3.1-375組與PC3.1組、HGC組間增殖曲線有明顯差異，PC3.1-375組細(xì)胞增殖顯著低于PC3.1組及HGC組(P<0.05)；Annexin V-PI流式細(xì)胞結(jié)果示，PC3.1-375組凋亡率高于對照 HGC組及 PC3.1組(P<0.05)，HGC組及 PC3.1組間的細(xì)胞凋亡無顯著性差異(P>0.05)；Western blotting結(jié)果示：AEG-1蛋白在PC3.1-375組中的表達(dá)較HGC組及PC3.1組下降

4、；各組裸鼠皮下接種腫瘤細(xì)胞5天后均成功致瘤，成瘤率100％，繪制各組種植瘤生長曲線，各組種植瘤持續(xù)生長，未出現(xiàn)致瘤裸鼠死亡，PC3.1-375組種植瘤生長速度及腫瘤體積顯著低于HGC組及PC3.1組（P<0.05)，終點(diǎn)時間第30天時，HGC組裸鼠皮下種植瘤的體積為(3.12±0.77)cm3，PC3.1組為(3.76±0.65)cm3，顯著大于PC3.1-375組腫瘤體積(0.72±0.21)cm3(P<0.05)，PC3.1-375

5、組種植瘤平均質(zhì)量為(0.85±0.15)g，明顯低于PC3.1組(4.01±0.52)g及HGC組(3.86±0.56)g，PC3.1組與HGC組間腫瘤質(zhì)量無顯著性差異(P>0.05)；免疫組化結(jié)果證實(shí)AEG-1蛋白在PC3.1-375組種植瘤中的表達(dá)明顯下調(diào)，與 HGC及 PC3.1組有顯著差別(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中， miR-375可有效抑制胃癌細(xì)胞HGC-27的增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡；AEG-1可能是m