臂叢神經(jīng)根撕脫回植后應(yīng)用神經(jīng)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 探討臂叢根性撕脫傷后，神經(jīng)干細(xì)胞脊髓內(nèi)移植對前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的挽救效應(yīng)，并探討其作用機(jī)制，觀察神經(jīng)干細(xì)胞在脊髓內(nèi)的存活和分化。觀察回植后的神經(jīng)根的生長情況。 方法： 1.選取孕齡15～18天的Wistar大鼠5只，取胎鼠腦組織，分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，在體外培養(yǎng)、擴(kuò)增，并在移植前一天用5溴-2脫氧尿苷(BrdU)標(biāo)記。 2.選成年SD大鼠60只，雌雄各半，5％氯氨酮(300～350mg/kg)腹腔注射麻

2、醉后，進(jìn)行頸4～頸7椎板減壓，于椎管內(nèi)硬脊膜外撕脫頸5～頸6神經(jīng)根，將頸6神經(jīng)前根回植入脊髓前角，用11-0無創(chuàng)傷線縫合2針，后根曠置，頸5神經(jīng)根埋入肌肉。然后用微量進(jìn)樣器將神經(jīng)干細(xì)胞移植于頸6脊髓節(jié)段的脊髓前角附近。 3.于術(shù)后2、4、6、8、12、24周取脊髓標(biāo)本，作HE染色，免疫組織化學(xué)染色，凋亡染色。觀察脊髓前角細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和數(shù)量的變化，神經(jīng)干細(xì)胞的存活和分化情況。 結(jié)果： 1.術(shù)后57只大鼠存活，3只死

3、亡。，所有大鼠均表現(xiàn)為單側(cè)上肢癱瘓，雙下肢和對側(cè)上肢無影響。 2.臂叢神經(jīng)根性撕脫回植傷后各時(shí)間點(diǎn)脊髓橫斷面HE染色顯示：神經(jīng)根撕脫側(cè)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體萎縮，部分運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元水腫，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，到術(shù)后24周時(shí)，對照組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元減少達(dá)84.3％，實(shí)驗(yàn)組63.7％。并且各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活率均高于對照組。 3.免疫組織化學(xué)染色顯示：實(shí)驗(yàn)組損傷側(cè)脊髓前角內(nèi)可見散在的染色呈棕黃色的神經(jīng)干細(xì)胞，仍保持未分化的形態(tài)學(xué)特征