2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩61頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、本課題以本所自行成功研制的鼠抗人CD40激發(fā)型單克隆抗體5C11為研究對象,借助計(jì)算機(jī)輔助分子設(shè)計(jì)與蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)模擬技術(shù),利用抗原-抗體相互作用原理,計(jì)算機(jī)模擬得到抗原CD40與抗體5C11的主要結(jié)合位點(diǎn),從而推測出抗體識別的抗原表位;結(jié)合文獻(xiàn)報道的CD40-CD40L互相作用位點(diǎn),通過定點(diǎn)突變技術(shù)、構(gòu)建突變體基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,驗(yàn)證計(jì)算機(jī)模建結(jié)果的可靠性,從而確定抗體識別的抗原表位,對5C11抗體進(jìn)行人源化改造或研制抗人

2、CD40抗體臨床用藥具有理論和潛在的臨床意義。
   目的:通過計(jì)算機(jī)模擬與生物實(shí)驗(yàn),初步確定本所研制的抗人CD40激發(fā)型單抗5C11識別的抗原表位。
   方法:利用InsightⅡ軟件分別模擬抗原、抗體結(jié)構(gòu),以及搭建抗原抗體復(fù)合物模型,通過計(jì)算并推測抗體所識別的抗原表位。通過RT-PCR的方法分別獲得人野生型CD40(wtCD40)和70位突變(70muCD40)及114位突變(114muCD40)的全長基因,構(gòu)建重

3、組真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40并進(jìn)行鑒定;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組表達(dá)載體導(dǎo)入HEK293細(xì)胞;RT-PCR和FCM的方法鑒定重組表達(dá)載體;FCM、Western Blot法比較5C11分別與HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的結(jié)合。
   結(jié)果:(1)搭建合

4、理的抗原CD40胞外段與抗體5C11 Fv結(jié)構(gòu)的復(fù)合物模型。(2)酶切和測序結(jié)果均證實(shí)成功構(gòu)建3個真核表達(dá)載體;RT-PCR和FCM檢測結(jié)果表明,表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)染入HEK293細(xì)胞。(3)FCM結(jié)果表明5C11與HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40結(jié)合較之與HEK293/wtCD40結(jié)合的平均熒光強(qiáng)度有減弱的趨勢;Western blot檢測結(jié)果表明5C11僅識別HEK293/wtCD40,不識別HEK293

5、/70muCD40和HEK293/114muCD40。由此表明5C11識別HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40的能力降低。
   結(jié)論:預(yù)測5C11識別的抗原表位是15-17、23、43-56、68-80、85、87、100-115;成功構(gòu)建HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,證實(shí)人CD40序列的第70位蘇氨酸和第114位谷氨酸是

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論