CD73對人乳腺癌細胞惡性生物學行為的影響及其機制的研究.pdf

1、腫瘤擴散(或腫瘤轉移)是指惡性腫瘤細胞由原發(fā)部位向周圍組織的侵襲和向不連續(xù)的遠隔部位或器官的轉移。腫瘤擴散是癌癥患者死亡的最主要原因，也是腫瘤惡性的重要標志和最本質(zhì)的表現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤擴散是一系列具有內(nèi)在聯(lián)系的多個步驟相互作用、多個因素共同參與的結果。而腫瘤細胞的黏附、侵襲及運動等惡性生物學行為在腫瘤擴散中發(fā)揮極其重要的作用。 CD73又稱為胞外．5’．核苷酸酶(Ecto-5’-Nucleotidase，EC3．13．5，ec

2、to-5'-NT)，通過糖基．磷脂酰肌醇錨定于細胞膜外表面，其功能可以分為兩部分：一是水解酶活性，參與嘌呤核苷酸的補救合成途徑，水解AMP生成腺苷；另一個是非酶活性，參與細胞跨膜信號轉導及細胞黏附等生理功能。 近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，CD73與腫瘤轉移有關。臨床研究結果顯示，乳腺癌組織中CD73的表達和活性明顯增高，尤其是已發(fā)生淋巴結轉移的癌組織中CD73的升高更為顯著。雌激素受體陰性的乳腺癌較易發(fā)生轉移，而雌激素受體陰性乳腺癌細胞的

3、CD73表達明顯高于雌激素受體陽性的乳腺癌細胞，二者呈負相關。本研究以此為線索，檢測了不同惡性程度的乳腺癌細胞株中CD73的基因表達和活性，同時也進一步深入研究了CD73對乳腺癌細胞黏附、侵襲和運動能力的影響及其機制。 本文主要使用：脂質(zhì)體轉染、高效液相層析法(highperformanceliquidchromatography，HPLCl、Westernblot、RT-PCR、體外侵襲力實驗、體外運動力實驗、體外黏附力實驗、

4、ELISA等研究方法。 研究結果發(fā)現(xiàn)：高度惡性人乳腺癌細胞株BT549、MDA231、MDA-MB-435的CD73基因表達和酶活性明顯高于低度惡性腫瘤細胞株T-47D。用脂質(zhì)體將質(zhì)粒pcDNA-NT5E轉染T-47D細胞以后，轉染細胞Trans-T-47D的CD73mRNA表達和CD73活性顯著升高，并且其侵襲力、運動力以及對細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的黏附力也明顯增強。 轉染細胞Tr

5、ans-T-47D進一步用CD73的特異性抑制劑α，β-亞甲基二磷酸腺苷(alpha，beta-methyleneADP，APCP)孵育，結果顯示，APCP可以抑制轉染細胞的侵襲力、運動力和黏附力；APCP孵育后再加入腺苷發(fā)現(xiàn)，腺苷可以逆轉APCP對轉染細胞的抑制作用。腺苷也能增強未轉染細胞T-47D的侵襲力、運動力及黏附力，這種促進作用呈劑量依賴性。 表皮生長因子受體(epithelialgrowthfactorrecepto

6、r,EGFR)與乳腺癌患者的復發(fā)、轉移及預后密切相關。本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌細胞CD73的表達和EGFR的表達具有相關性；低表達CD73的乳腺癌細胞通過轉染過表達CD73后，其EGFR的mRNA和蛋白表達也明顯上調(diào)。 白介素．8(interleukin-8，IL-8)可以增強癌細胞的侵襲力，促進腫瘤轉移。本實驗首先觀察到，乳腺癌細胞株CD73的表達和其培養(yǎng)液中IL-8的蛋白含量相關；進一步的研究發(fā)現(xiàn)，轉染細胞Trans-T-47DC

7、D73表達增強后其IL-8的mRNA表達和培養(yǎng)液中IL-8的蛋白含量也顯著升高。 文獻報道，EGFR信號轉導途徑能上調(diào)IL-8的表達。為了驗證在過表達CD73的轉染細胞培液中IL-8含量升高是否與表皮生長因子有關，我們在轉染細胞培液中加入了表皮生長因子。結果顯示，加入表皮生長因子后IL-8含量沒有明顯變化。說明在過表達CD73的轉染細胞中，是CD73表達增強促進了IL-8的合成，而與表皮生長因子無關。 分別用APCP和C

8、D73的單克隆抗體1．E9孵育轉染細胞Trans-T-47D，結果顯示，APCP和1一E9都不能影響轉染細胞培液中IL-8的蛋白含量。表明CD73促進IL-8的合成并非通過腺苷信號轉導途徑，也不受1．E9結合位點的影響。 基于上述結果我們得出以下結論：1．人乳腺癌細胞CD73的表達和活性與腫瘤的惡性程度有關；2．CD73增強人乳腺癌細胞的侵襲力、運動力和黏附力；3．CD73通過產(chǎn)生腺苷促進人乳腺癌細胞的黏附、侵襲和運動；4．CD