豬圓環(huán)病毒Ⅰ型、Ⅱ型全基因克隆及其基因交換重組的研究.pdf

1、丫78347E；分類號UDC$8582853學位論文密級學號B010702豬圓環(huán)病毒I型、II型全基因克隆及其基因交換重組的研究朱玲指導教師姓名；郭萬柱教授(四川農(nóng)業(yè)大學)申請學位級別：博士專業(yè)名稱：預防獸醫(yī)學●______一●______________________________一論文提交日期：2005年6月16日論文答辯日期l2005年6月學位授予單位和日期t四川農(nóng)業(yè)大學2005年7月3日答辯委員會主席：評閱人：馬用信教授謝慶

2、閣、周蛟、陳溥吉、汪明、王琴2005年6月中文摘要研究中參照豬圓環(huán)病毒(Porcinecircovirus，PCV)的基因組特點，自行分離鑒定PCVl一YAl和PCV2SC株兩個四川分離株，分別克隆其全基因；采用酶切、連接技術實現(xiàn)了兩個毒株間部分基因交換，即將PCV2的ORFl克隆到PCVI上，構(gòu)建重組病毒疫苗株PCV卜2；將PCVl的ORFl克隆到PCV2上構(gòu)建重組病毒疫苗株PCV2一l。并采用單酶切消化、外切酶部分降解等操作構(gòu)建了P

3、CV2部分基因組的真核表達質(zhì)粒pEGFPCPCV2一SC—A。研究目的在于以期望能篩選研究豬圓環(huán)病毒新型基因工程疫苗，同時也為開展PCV病毒功能基因組學研究奠定基礎。1豬圓環(huán)病毒I型YAl株的全基因克隆及生物信息學分析試驗中采用1對特異性引物(P1／P2)，1次性擴增獲得了1759bp的豬圓環(huán)病毒I型(PCV卜YAl株)全基因組，將其克隆于pMDl8T質(zhì)粒，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMDl8T—PCVl一YAl并進行了核苷酸序列測定及氨基酸序列推

4、導。PCV卜YAl株與Genbank中公布的其它7個PCVl毒株間的同源性高達988—999％。氨基酸序列推導顯示，PCVl一YAl株ORFl編碼312個氨基酸，在20—22aa(NPS)有一個糖基化位點；ORF2編碼233個氨基酸，在102—104aa(NYS)存在一個糖基化位點。疏水性和跨膜區(qū)分析結(jié)果表明PCVlYAl株的ORFl集中在3個部分出現(xiàn)9個潛在疏水性區(qū)域和2個跨膜區(qū)；ORF2則存在2個潛在疏水性區(qū)域和1個跨膜區(qū)。2豬PC

5、V2SC株的分離鑒定及其全基因克隆與生物信息學分析ELISA檢測及熒光抗體檢測確診豬圓環(huán)病毒臨床病例，分離了豬圓環(huán)病毒野毒(PCV2一SC)株。本試驗中采用1對特異性引物(P3／P4)，1次性擴增獲得了1767bp的豬圓環(huán)病毒II型PCV2一SC株全基因組，將其克隆于pMDl8一T質(zhì)粒，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMDl8T—PCV2一SC并進行了核苷酸序列測定及氨基酸序列推導。通過BLAST與GenBank中來自美洲、歐洲及中國的部分PCV2毒株