急性髓系白血病M2型CD34+細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、背景與目的:
　　 急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia，AML）是一類起源于一小群異常細(xì)胞，即白血病干細(xì)胞(leukemia stem cells，LSCs)的造血系統(tǒng)惡性疾病。LSCs具有自我更新和分化的能力，是AML發(fā)生及復(fù)發(fā)的根源。然而，目前對LSCs的特性仍所知甚少。蛋白質(zhì)組學(xué)是以生命功能的執(zhí)行者蛋白質(zhì)為切入點(diǎn)，直接研究蛋白質(zhì)的組成與調(diào)控。作為一種簡單、快速、高通量的技術(shù)，蛋白質(zhì)組學(xué)為腫瘤發(fā)病機(jī)

2、制的研究、診治起著重要的作用。為此，本研究選擇AML-M2型白血病CD34+細(xì)胞作為研究對象，尋找AML-M2型白血病特異性/相關(guān)性蛋白分子，以探索AML-M2型白血病發(fā)病的分子機(jī)制，分子診斷和治療的靶點(diǎn)。
　　 方法:
　　 首先，應(yīng)用免疫磁珠分選(magnetic active cell sorting，MACS)方法，從AML-M2初治患者骨髓及造血干細(xì)胞移植供者動員后的外周血中分選出CD34+細(xì)胞，并用流式細(xì)胞術(shù)

3、檢測其純度。然后，通過熒光差異雙向凝膠電泳(fluorescence two-dimensional difference in-gelelectrophoresis，2-D DIGE)分離CD34+細(xì)胞的蛋白質(zhì)，并通過Typhoon掃描儀獲取凝膠圖譜，DeCyder圖像分析軟件識別差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)。最后，通過質(zhì)譜以及生物信息學(xué)對差異表達(dá)蛋白點(diǎn)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 經(jīng)MACS分選后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測所得細(xì)胞的純

4、度結(jié)果顯示，病人CD34+細(xì)胞純度平均為98％，正常人CD34+純度平均為92％。熒光差異雙向凝膠電泳結(jié)果表明，在正常對照與AML-M2型白血病CD34+細(xì)胞之間存在1.1倍以上差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)有25個(gè)。對這25個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)一步通過質(zhì)譜進(jìn)行分析，得到了15個(gè)蛋白質(zhì)肽指紋圖信息。生物信息學(xué)分析顯示，這些蛋白點(diǎn)可能代表的蛋白質(zhì)包括熱休克蛋白90β、2型熱休克蛋白90α、熱休克蛋白70類似物、熱休克蛋白70-1、熱休克蛋白70-2、轉(zhuǎn)鐵

5、蛋白、血清轉(zhuǎn)鐵蛋白前體、人增殖細(xì)胞核抗原、鈣調(diào)結(jié)合蛋白、鈣網(wǎng)蛋白前體、丙酮酸激酶、M2型丙酮酸激酶、醛還原酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADP+)、PRO2619蛋白以及未知蛋白質(zhì)分子，這些蛋白質(zhì)涉及細(xì)胞能量代謝、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞耐藥、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞增殖。
　　 結(jié)論:
　　 應(yīng)用MACS方法、蛋白質(zhì)組學(xué)及生物信息學(xué)，本研究成功篩選出AML-M2型白血病CD34+細(xì)胞差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，這些蛋白分子可能與CD34+細(xì)胞的自我