MALDI-TOF-MS聯(lián)合磁珠技術(shù)對(duì)乳腺癌腫瘤標(biāo)記物的篩選和鑒定.pdf

1、目的：應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）聯(lián)合磁珠技術(shù)建立乳腺癌診斷模型，發(fā)現(xiàn)乳腺癌特異性腫瘤標(biāo)志物并鑒定蛋白和驗(yàn)證。
　　 方法：收集32例乳腺癌患者和59例正常人的血清，高速離心后-80℃冰箱保存。樣本在一個(gè)凍融周期內(nèi)同批進(jìn)行MALDI-TOF-M

2、S聯(lián)合磁珠分析，應(yīng)用BiomarkerWizard軟件識(shí)別蛋白峰信息，用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，然后應(yīng)用Biomarker Patterns軟件建立乳腺癌診斷模型并確定目標(biāo)蛋白。應(yīng)用磁珠純化蛋白后用Tricine-SDS-PAGE電泳分離蛋白，然后用肽質(zhì)量指紋圖譜對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行鑒定，最后用免疫沉淀法對(duì)已鑒定蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：通過(guò)軟件分析找到136個(gè)符合條件的差異蛋白峰，并用其中的三個(gè)，即M11692.

3、4，M15111.4和M15909.8建立了乳腺癌的診斷模型，敏感性達(dá)到96.875％，特異性達(dá)到98.305％。磁珠純化后的蛋白濃度達(dá)到8.33ug/ul，達(dá)到電泳上樣量的標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)用Tricine-SDS-PAGE電泳成功分離目標(biāo)蛋白，并成功鑒定三個(gè)目標(biāo)蛋白，分別為人血紅蛋白α和β鏈以及人血清淀粉樣蛋白A（SAA），最后用免疫沉淀方法成功驗(yàn)證了人血紅蛋白α鏈和SAA。
　　 結(jié)論：本研究建立的樹(shù)形分類(lèi)模型能夠以高敏感性和特異性