利用免疫蛋白組學技術(shù)篩選和鑒定胃癌腫瘤相關(guān)抗原及血清腫瘤標記物.pdf

1、背景與目的：腫瘤相關(guān)抗原是潛在的腫瘤標志物，對腫瘤的早期篩選具有重要價值。因此，系統(tǒng)、全面地研究腫瘤相關(guān)抗原對于腫瘤標志物的篩選具有重要意義。本研究采用免疫蛋白組學技術(shù)(Immunoproteomics)篩選胃癌腫瘤相關(guān)抗原及血清腫瘤標記物。 方法：取15例人胃癌組織，應(yīng)用雙向凝膠電泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)技術(shù)對同一胃癌患者的胃癌組織(2份)、癌旁組織及遠端正常胃粘膜組織的細

2、胞總蛋白同時進行電泳后獲得4張雙向凝膠，其中一塊2-DE凝膠是銀染顯色的胃癌組織細胞蛋白作為平行膠，其余三塊2-DE凝膠經(jīng)半干轉(zhuǎn)印將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜上，分別與胃癌患者的自身血清進行免疫印跡分析，建立2DE/Western blot反應(yīng)圖譜。 經(jīng)計算機圖像分析識別差異反應(yīng)的蛋白點，然后與平行膠比較確定相應(yīng)的差異反應(yīng)蛋白質(zhì)點，采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)

3、譜(Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight MassSpectrometry，MALDI-TOF MS)對相應(yīng)的差異蛋白質(zhì)點進行鑒定，篩選和鑒定胃癌相關(guān)腫瘤抗原。 結(jié)果： 1.獲得了分辨率較高且匹配性較好的人胃癌組織總蛋白2-DE圖譜，15塊膠的平均點數(shù)為839±24，匹配點數(shù)為752±2l，平均匹配率為89.6％。 2.人胃癌組織、癌

4、旁組織及遠端正常胃粘膜組織分別與患者自身血清進行免疫印跡分析，獲得分辨率較高的Western blotting反應(yīng)圖譜，圖像分析共識別23個差異反應(yīng)的蛋白質(zhì)，在平行膠上找到了相應(yīng)匹配的差異反應(yīng)蛋白質(zhì)點，質(zhì)譜鑒定分析、鑒定出17個蛋白點，分別為錳超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD)、膽綠素還原酶B(biliverdin reductase B,BVR B)、α-烯醇酶及其異構(gòu)體烯醇酶-

5、1、6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯酶、中間絲波形蛋白異構(gòu)體、核有絲分裂器蛋白1異構(gòu)體、熱休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)、絲狀肌動成帽蛋白α-1亞單位、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、核不均-核糖核蛋白A2/B1(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1，hnRNP A2/B1)、微管蛋白β5、纖維蛋白素原β-鏈前蛋白原、醛脫氫酶9A1、鳥苷酸結(jié)合蛋白β-2亞單位、抗

6、體酶、平滑肌鈣結(jié)合蛋白1。這些蛋白與細胞生長增殖、細胞代謝、細胞周期調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導等有關(guān)。 結(jié)論： 1.獲得了分辨率較高且匹配性較好的人胃癌組織總蛋白2-DE圖譜。 2.首次應(yīng)用人胃癌組織、胃癌癌旁組織及遠端正常胃粘膜組織蛋白與胃癌患者自身血清反應(yīng)獲得了分辨率較高的2-DE/Western blot反應(yīng)圖譜。 3.成功鑒定17個胃癌相關(guān)抗原，為進一步篩選用于胃癌診斷、治療和預后評估的胃癌分子標志物奠定了堅