45444.蘇云金芽胞桿菌幕蟲亞種晶胞粘連現(xiàn)象與其內(nèi)生質(zhì)粒有關(guān)

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文蘇云金芽胞桿菌幕蟲亞種晶胞粘連現(xiàn)象與其內(nèi)生質(zhì)粒有關(guān)姓名：鞠守勇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：孫明20060601華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文鞠守勇摘要蘇云金芽胞桿菌幕蟲亞種(Bacillusthuringiensissubspfinitimus)YBT020，含有三個(gè)內(nèi)生質(zhì)粒，能形成兩種伴胞晶體。當(dāng)芽胞形成細(xì)胞裂解后，一種晶體被釋放出來(lái)，形成自由的伴胞晶體，另一種在芽胞外壁內(nèi)側(cè)形成，成熟后被包裹在

2、芽胞外壁以內(nèi)不脫落，始終和芽胞粘連在一起。PCR篩選了2162個(gè)經(jīng)過(guò)高溫消質(zhì)粒處理的YBT020菌落，其中75個(gè)消除了cry26Aa基因：19個(gè)菌落同時(shí)消除了cry26Aa和cry28Aa基因。通過(guò)脈沖電泳和Southern雜交分析得到了僅消除cry26Aa所在質(zhì)粒的菌株BMBI151和其無(wú)質(zhì)粒的菌株BMBl152。從形態(tài)學(xué)，生理生化和SDSPAGE三個(gè)方面對(duì)YBT020，BMBll51和BMBll52做了進(jìn)一步分析。將cry26Aa和

3、cry28Aa兩個(gè)基因分別和同時(shí)在YBT020無(wú)質(zhì)粒的菌株BMBll52中表達(dá)，發(fā)現(xiàn)晶體與芽胞獨(dú)立存在不能粘連；將cry26Aa在僅消除cry26Aa所在質(zhì)粒的菌株BMBl151中表達(dá)，發(fā)現(xiàn)晶體與芽胞也獨(dú)立存在不能粘連，從而推測(cè)晶胞粘連現(xiàn)象與cry26Aa所在內(nèi)生質(zhì)粒有關(guān)。為進(jìn)一步闡述晶胞粘連的分子機(jī)制指明了研究的方向和提供了很好的受體材料。目前電轉(zhuǎn)化的方法普遍用于蘇云金芽胞桿菌基因工程，但是電轉(zhuǎn)化的過(guò)程中容易造成野生菌株發(fā)生突變(內(nèi)生

4、質(zhì)粒丟失等)，而且很難將較大質(zhì)粒(30Kb)電轉(zhuǎn)化進(jìn)入蘇云金芽胞桿菌中，目前還沒(méi)有好的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)蘇云金芽胞桿菌較大質(zhì)粒(30Kb)的轉(zhuǎn)化。通過(guò)將OriT插入到穿梭載體pHT304中構(gòu)建了含有OriT位點(diǎn)的可誘動(dòng)穿梭質(zhì)粒pBMB0951，在菌株EcoliS171或者幫助質(zhì)粒pRK2073的作用下，將大腸桿菌中的質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移到了蘇云金芽胞桿菌庫(kù)斯塔克亞種無(wú)質(zhì)粒菌株BMBl71中，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)蘇云金芽胞桿菌的改造，為下一步野生性菌株接合轉(zhuǎn)移系統(tǒng)