番茄抗逆相關(guān)基因ShZFP1的克隆與功能分析.pdf

1、低溫、干旱、高鹽等非生物脅迫是制約番茄生產(chǎn)和分布的重要因素，發(fā)掘番茄抗逆相關(guān)基因并對(duì)其進(jìn)行功能研究，是目前為止解決這一難題最可行的辦法。植物鋅指蛋白是一類(lèi)數(shù)量龐大的轉(zhuǎn)錄因子家族，其作用貫穿于植物生長(zhǎng)發(fā)育整個(gè)過(guò)程，植物C2H2型雙鋅指蛋白大多與植物非生物脅迫應(yīng)答有關(guān)，能夠提高轉(zhuǎn)基因植物的抗逆能力。野生番茄具有抗逆性強(qiáng)等優(yōu)良性狀，是番茄遺傳改良的重要種質(zhì)資源。本研究根據(jù)耐寒芯片分析結(jié)果，從野生多毛番茄LA1777中克隆出一個(gè)C2H2型鋅指蛋

2、白基因ShZFP1，并對(duì)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了抗逆性功能驗(yàn)證。主要研究結(jié)果如下:
　　1.ShZFP1編碼163個(gè)氨基酸，具有C2H2型雙鋅指蛋白典型結(jié)構(gòu)，與矮牽牛ZPT2-12、ZPT2-13具有較高的同源性，與普通栽培番茄序列相比，有兩個(gè)氨基酸的插入和幾處氨基酸位點(diǎn)的變化。
　　2.組織表達(dá)分析表明ShZFP1在LA1777各組織中呈組成型表達(dá)，在根中的相對(duì)表達(dá)量最高;誘導(dǎo)表達(dá)分析表明該基因的表達(dá)受低溫、干旱和高鹽等多種逆境脅

3、迫及ABA的誘導(dǎo)。
　　3.構(gòu)建ShZFP1超量表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法將其轉(zhuǎn)入普通栽培番茄A57，成功獲得轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系。
　　4.在1/2MS培養(yǎng)基上模擬低溫、干旱和高鹽脅迫，驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因番茄幼苗對(duì)非生物逆境的耐受能力，超表達(dá)ShZFP1株系顯著降低了其對(duì)低溫、高鹽及滲透脅迫的敏感性，促進(jìn)幼苗在各脅迫下的生長(zhǎng)發(fā)育，改變了番茄抗逆相關(guān)marker基因如LeP5CS、SlBADH、SlLEA、、SlCBF1、Sp