豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)SN07-12株滅活疫苗的研究.pdf

1、2007年12月，上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所從蘇南地區(qū)一發(fā)病豬場(chǎng)采集病料，分離到一株P(guān)CV2病毒，命名為SN07-12株，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了全病毒滅活苗的研制，論文主要內(nèi)容如下:
　　 1.豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)SN07-12株的優(yōu)化培養(yǎng)。本試驗(yàn)通過(guò)調(diào)整PK15細(xì)胞濃度，優(yōu)化收毒時(shí)間等方法，在連續(xù)傳代的過(guò)程中獲得較高滴度的SN07-12株病毒培養(yǎng)物。并通過(guò)試驗(yàn)表明，收獲液上清中含有較高效價(jià)的病毒量，調(diào)節(jié)PCV2吸附階段、培

2、養(yǎng)階段的培養(yǎng)基血清含量，血清含量由常規(guī)工藝的8％降為2％,利用新工藝生產(chǎn)的3批病毒效價(jià)與傳統(tǒng)工藝相當(dāng)，說(shuō)明新工藝批次差異小，可以作為PCV2的生產(chǎn)工藝。
　　 2.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和間接免疫熒光法(IFA)測(cè)定豬圓環(huán)病毒2型半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)感染量(TCID50)的比較。初步比較兩種方法測(cè)定病毒滴度的差異，并采用熒光定量PCR（Real-time PCR）法對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明IFA法比PCR法敏感準(zhǔn)確，更適宜用于測(cè)定

3、PCV2的效價(jià)。
　　 3.不同滅活方法對(duì)豬圓環(huán)病毒2型SN07-12株滅活效果的研究。采用終濃度為0.1％和0.2％的二乙烯亞胺(BEI)、0.1％和0.2％的甲醛對(duì)PCV2滅活，不同時(shí)間點(diǎn)取樣，IFA檢測(cè)病毒滅活效果。結(jié)果顯示，蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)中，BEI滅活組PCV2抗原蛋白陽(yáng)性信號(hào)明顯強(qiáng)于甲醛滅活組。首次證明，BEI對(duì)PCV2表面蛋白破壞小，能夠更好的保留其抗原性，而且對(duì)滅活時(shí)間做了充分明確的研究，為新型PCV2疫苗的研制奠

4、定基礎(chǔ)。
　　 4.豬圓環(huán)病毒2型(PCV2) SN07-12株感染BALB/c小鼠的研究。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCV2-SH株可以感染BALB/c小鼠，為利用無(wú)PCV2感染的BALB/c小鼠來(lái)研究PCV2的致病機(jī)理和為今后建立合適的動(dòng)物發(fā)病模型提供理論參考。
　　 5.豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)SN07-12株全病毒滅活苗的研制及其免疫效力的研究。使用0.1％BEI滅活2％血清培養(yǎng)的病毒液32h，IFA檢測(cè)完全滅活，與IS