葡萄WRKY基因的克隆和功能分析.pdf

1、葡萄在生長發(fā)育過程中經常會遇到病蟲害等生物脅迫以及干旱、低溫、機械損傷等非生物脅迫，他們會影響作物的產量和品質，頻繁使用農藥化肥不能從根本上解決問題，只有研究高抗性新品種才是解決植物病蟲害及環(huán)境脅迫的技術對策。研究表明，當植物受到生物或非生物脅迫后，轉錄因子會結合到DNA特定位點上，激活或抑制下游基因的表達，從而在植物防御反應中發(fā)揮調控作用。因此，利用植物本身具有的轉錄因子來進行經濟作物的遺傳改良是一條可行的技術路線。WRKY是植物特有

2、的一類轉錄因子，本研究以葡萄為對象，探索WRKY轉錄因子參與基因表達調控反應的分子機制。從葡萄中克隆得到2個WRKY家族基因，分別對其做了生物信息學分析、表達模式分析以及超表達抗性分析，主要內容如下：
　　 1.對葡萄WRKY轉錄因子家族的56個成員進行同源性分析，選出2個基因Vv WRKY10及Vv WRKY26進行克隆，得到了含有完整開放閱讀框和保守WRKY結構域的cDNA序列，對其進行了生物信息學分析：
　　 1)

3、.利用生物信息學相關網站和軟件，對兩個蛋白的氨基酸序列組成、信號肽及磷酸化位點等進行了分析，分析結果表明葡萄Vv WRKY10及Vv WRKY26屬于第二類WRKY蛋白，都含有1個保守的WRKY結構域，不具有核定位信號，并且在絲氨酸、蘇氨酸及酪氨酸處都有磷酸化位點。
　　 2).利用blastp及DNAMAN對Vv WRKY10、Vv WRKY26蛋白及其他物種的WRKY蛋白進行了序列比對及同源進化樹的構建，分析發(fā)現(xiàn)這些蛋白均有

4、不同程度的相似，相似區(qū)域主要集中在保守的WRKY結構域處。
　　 2.采用實時熒光定量PCR的方法，分析了葡萄Vv WRKY10及Vv WRKY26基因在SA、ET及機械損傷下表達量的變化，分析表明兩個基因在脅迫條件下，表達量均發(fā)生了明顯的變化，并呈現(xiàn)一定的規(guī)律。
　　 3.構建了葡萄Vv WRKY10及Vv WRKY26基因超表達載體，利用農桿菌介導法轉化擬南芥，篩選鑒定后獲得轉基因擬南芥純系植株。
　　 上述