細粒棘球絳蟲感染犬及EgM9蛋白免疫犬引起的免疫應答研究.pdf

1、目前，國內外對宿主抗細粒棘球絳蟲免疫的研究主要集中在宿主體內的免疫保護、免疫逃避與免疫損傷機制。有很多關于細粒棘球絳蟲病的中間宿主的免疫抗原Eg95的研究報道，但對終末宿主犬的免疫保護抗原還在研究當中。本研究通過免疫組織化學方法與分子生物學方法，探索宿主感染細粒棘球絳蟲和EgM9蛋白免疫后，機體外周免疫系統(tǒng)、腸道的粘膜免疫系統(tǒng)產生免疫應答的情況，以期為臨床研制相關疫苗提供實驗依據。
　　 本研究首先經pET-41b重組質粒轉化的

2、大腸埃希菌（BL-21）對EgM9蛋白進行誘導表達，通過SDS-PAGE對表達產物進行分析，證明所表達的確實為EgM9蛋白，再對其進行純化，得到符合免疫抗原要求的EgM9重組目的蛋白。
　　 將實驗犬分為四組（Ⅰ組：EgM9蛋白免疫組；Ⅱ組：EgM9蛋白免疫后感染原頭蚴組；Ⅲ組：直接感染原頭蚴組；Ⅳ組：空白對照組），用純化后的EgM9蛋白對Ⅰ組和Ⅱ組進行免疫試驗，再分別對Ⅱ組和Ⅲ組人工感染原頭蚴。將實驗犬剖檢后進行荷蟲數計算，結

3、果表明用EgM9蛋白免疫犬后，可以使犬取得一定的免疫保護效果。
　　 采集實驗犬的腸系膜淋巴結和小腸，依據免疫酶組織化學和免疫熒光組織化學原理，運用直接法和抗原~抗體~抗體標記物法對其進行檢測。直接法結果表明Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組犬的腸系膜淋巴結和小腸上存在IgG抗體，反應都呈陽性；抗原~抗體~抗體標記物法結果表明Ⅰ組、Ⅱ組表現(xiàn)陽性，而Ⅲ組呈陰性，熒光顯微鏡下有明顯的熒光位點，說明該方法可以對免疫犬的腸系膜淋巴結和小腸上的IgG進行定

4、位檢測。
　　 通過Real-Time PCR對上述實驗犬的腸系膜淋巴結和小腸組織中的三種細胞因子（IL-4、TGF-β和INF-γ）檢測，表明I組和Ⅲ組實驗犬的腸系膜淋巴結和小腸中IL-4與INF-γ均有明顯變化，IL-4的數值遠高于INF-γ，而在II組中，IL-4的數值雖然也高于INF-γ，但IL-4與INF-γ的數值同時也高于其他兩組。結果表明不論對犬進行免疫還是感染，都能引起Th1型和Th2型反應，但以Th2型反應為主