健康和溶藻弧菌感染條件下斜帶石斑魚消化道菌群結(jié)構(gòu)的研究.pdf

1、本文以斜帶石斑魚仔稚魚、不同生長速度的兩批幼魚及溶藻弧菌感染后的斜帶石斑魚為研究對象,利用純培養(yǎng)方法結(jié)合PCR/DGGE方法對石斑魚消化道菌群結(jié)構(gòu)進行研究,主要結(jié)果如下：
　　 ⑴斜帶石斑魚仔稚魚消化道菌群結(jié)構(gòu)的研究。以斜帶石斑魚孵化后2d(未開口)仔魚、8d(開口仔魚)、22d仔魚、40d稚魚為研究對象,分析由孵化到稚魚的不同生長階段消化道菌群結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明,仔稚魚消化道可培養(yǎng)細菌總數(shù)隨著生長日齡的增加而逐漸遞增,由4.0×1

2、02CFU/尾增加到1.4×107CFU/尾;2d仔魚分離到乳酸菌,未分離到弧菌;8d、22d仔魚及40d幼魚均未分離到乳酸菌,22d仔魚、40d幼魚分離到弧菌;開口前后可培養(yǎng)細菌種類變化較大,種類由多到少。2d、8d、22d仔魚和40d幼魚可培養(yǎng)細菌種類分別為6種、3種、5種、10種;2d、8d及22d仔魚與進水口細菌種類有一定的相似,8d仔魚及22d仔魚與其餌料細菌種類有一定程度的相似。DGGE結(jié)果顯示,2d、8d和22d仔魚消化道

3、菌群DGGE圖譜相似,仔魚和40d稚魚消化道菌群DGGE圖譜存在明顯差異;仔魚與養(yǎng)殖水體菌群DGGE圖譜具有一定的相似性;22d仔魚與后期餌料輪蟲菌群圖譜相似性較高,8d仔魚與早期餌料牡蠣受精卵的相似性較低。
　　 ⑵不同生長速度斜帶石斑魚幼魚消化道菌群結(jié)構(gòu)的研究。利用純培養(yǎng)方法結(jié)合PCR/DGGE方法,分析不同生長速度70d幼魚消化道菌群結(jié)構(gòu)。純培養(yǎng)試驗結(jié)果表明,生長速度慢的幼魚消化道細菌總數(shù)(5.4×106CFU/g)少于生

4、長速度快的幼魚消化道細菌總數(shù)(9.0×106CFU/g),但生長速度慢的幼魚消化道弧菌數(shù)量(6.0x105CFU/g)明顯多于生長速度快的幼魚(3.4×105CFU/g),生長速度慢的幼魚消化道乳酸菌數(shù)量(1.5×105CFU/g)也多于生長速度快的幼魚消化道乳酸菌數(shù)量(6.0×104 CFU/g)。水樣中分離到的細菌總數(shù)(5.4×105CFU/ml)、弧菌數(shù)(2.2×103 CFU/ml)均少于幼魚消化道;水樣中未分離到乳酸菌。生長速

5、度慢的幼魚消化道中四種弧菌占細菌總數(shù)的12.3％,生長速度快的幼魚消化道中僅兩種弧菌,占細菌總數(shù)的比例降低到3.6％;生長速度慢的幼魚消化道中假單胞菌所占細菌比例12.0％,生長速度快的幼魚消化道中假單胞菌占細菌總數(shù)降低到5.6％。僅在生長速度快的幼魚消化道分離到短小芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌和嗜冷桿菌且數(shù)量占絕對優(yōu)勢。抑菌試驗表明,短小芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌和嗜冷桿菌對弧菌具有抑制生長作用。提示短小芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌和嗜冷桿菌可

6、能與石斑魚的生長和健康有關(guān)。系統(tǒng)進化樹結(jié)果表明,兩組幼魚消化道的17種細菌隸屬于γ-變形桿菌綱,β-變形桿菌綱和芽孢桿菌綱。DGGE結(jié)果顯示,生長速度慢的幼魚消化道菌群多樣性明顯低于生長速度快的幼魚消化道。割膠測序結(jié)果顯示,生長速度快的幼魚消化道優(yōu)勢菌隸屬于不動桿菌屬細菌(Acinetobacter baumannii)、結(jié)核桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、脫硫腸球菌屬細菌(Desulfotomaculum

7、 reducens)和Petrotoga mobilis;生長速度慢的幼魚優(yōu)勢菌均隸屬于不動桿菌屬(Acinetobacter)。
　　 ⑶溶藻弧菌感染后斜帶石斑魚消化道菌群結(jié)構(gòu)的研究。溶藻弧菌感染后斜帶石斑魚消化道菌群分析結(jié)果顯示,對照組胃(1.2×105CFU/g)、前腸(5.1×106CFU/g)和后腸(2.8×105CFU/g)和實驗組的胃(3.0×105CFU/g)、前腸(3.1×106CFU/g)、后腸(3.1x10

8、6 CFU/g)的細菌總數(shù)量相近;對照組石斑魚胃和后腸細菌種類明顯多于實驗組石斑魚胃和后腸,但對照組前腸細菌種類少于實驗組前腸細菌種類。DGGE結(jié)果顯示,對照組和實驗組細菌多樣性具有明顯差異。斜帶石斑魚胃菌群結(jié)構(gòu)在灌胃溶藻弧菌后第1d到第3d細菌多樣性變化不大,但第4d細菌種類明顯減少,第5d細菌種類則呈回升趨勢;前腸細菌多樣性分析顯示,實驗組第1d和對照組有一定的相似性,實驗組第3d和第4d相似性較高,細菌多樣性明顯減少;后腸細菌多樣

9、性分析顯示,灌胃溶藻弧菌第1d時,細菌種類較多,第4d時,細菌多樣性降到最低,對照組和實驗組第1d和第5d相似性較高,實驗組第3d和第4d相似性較高。割膠測序結(jié)果顯示,Escherichia coli、Petrotoga mobilis和Vibrio furnissii三種菌在對照組和實驗組5d內(nèi)的胃、前腸、后腸均檢測到,實驗組第4d細菌可檢出細菌種類很少,而Shewanella sp.和Vibriofischeri泳帶很強,為第4d的