商品蛋雞源J亞群禽白血病病毒分離株生物學(xué)特性研究.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文商品蛋雞源J亞群禽白血病病毒分離株生物學(xué)特性研究姓名：吳曉平申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：秦愛建20100501揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文種腫瘤的發(fā)育階段存在差異，可能是相繼發(fā)生。免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)：在肝臟、脾臟及其它組織內(nèi)的髓細(xì)胞內(nèi)、肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞、血管瘤壁層一1_皮細(xì)胞、脾臟網(wǎng)狀細(xì)胞內(nèi)可見陽性信號。因此，在褐色商品蛋雞中發(fā)現(xiàn)血管瘤、髓細(xì)胞瘤型伴發(fā)多種腫瘤表型的J亞群禽白血病，在國內(nèi)外尚屬首次報(bào)道，顯示出A

2、LVJ在我國商品蛋雞群中感染狀況的特殊性和嚴(yán)重性。2致商品蛋雞血管瘤型ALVJ分離鑒定將病理學(xué)檢測及ALV—J特異性RTPCR初步診斷為商品蛋雞血管瘤、髓細(xì)胞瘤型ALVJ感染的脾臟樣品懸液分別接種單層DFl細(xì)胞以分離病毒，并以ALVJ特異性單抗JE9進(jìn)行問接免疫熒光檢測(IFA)對分離毒進(jìn)行鑒定，結(jié)果證實(shí)從商品蛋雞血管瘤、髓細(xì)胞瘤型J亞群禽白血病病例中分離到7株ALV_J，在初診為ALVJ感染的病例中分離率為778％(7／9)。為追溯病

3、毒來源，對于所檢測的6個(gè)血管瘤發(fā)病雞場的共同父母代蛋雞場進(jìn)行ALV—J的ELISA檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在此父母代蛋雞場高日齡的雞群中存在14％(36周齡)和31％(60周齡)ALVJ特異性抗體，證實(shí)在此臨床表現(xiàn)正常的父母代蛋雞場中存在ALVJ感染。父母代蛋雞及商品蛋雞感染ALV—J的臨床表現(xiàn)不同，可能是由于遺傳背景對于ALV—J感染應(yīng)答的影響或者是垂直傳播及水平傳播的共同作用在蛋雞繁殖育雛過程中放大了ALVJ的感染。3J亞群禽白血病病毒cDN

4、A序列分析比較本研究設(shè)計(jì)3對ALVJ特異性引物，以分離株感染的DFl細(xì)胞基因組作為模板，進(jìn)行ALvJ前病毒DNA全基兇序列進(jìn)行分段PCR擴(kuò)增，分析比較了20072009年的商品蛋雞分離株NHH、JS09GY3、JS09GY6的全序列，JS09GY2、JS09GY5、HA08和HN的致瘤關(guān)鍵性序列，同時(shí)也對白羽肉雞分離株SD9901、YZ9901、YZ9902、NM20021和JSnt的全序列進(jìn)行比較和遺傳分析。結(jié)果表明：商品蛋雞群分離毒

5、株與肉雞群分離毒株的全序列差異明顯，在遺傳進(jìn)化樹上分屬兩個(gè)大的分支；對LTR的分析可見，R區(qū)最保守，U3區(qū)最易變異，商品蛋雞血管瘤型分離株NHH和JS09GY5的U3區(qū)域發(fā)生了不同的連續(xù)序列缺失。分析發(fā)現(xiàn)在商品蛋雞血管瘤相關(guān)病例分離毒(NHH、JS09GY2、JS09GY3、JS09G5及JS09GY6)的U3區(qū)內(nèi)含有幾個(gè)獨(dú)特的調(diào)控元件，包括C＼EBP、c—Ets1、TCFll，而其它一部分在肉雞分離毒中較為保守的作用元件如GKLF和L