牛乳鐵蛋白基因片段在原核細胞中的表達及牛乳鐵蛋白肽活性檢測.pdf

1、抗生素耐藥性已經(jīng)成為全球飼料工業(yè)和人醫(yī)藥界廣泛關注的課題，乳鐵蛋白肽成為一種很有前景的抗生素替代物，它由25個氨基酸組成的小肽，源自牛乳鐵蛋白氮端（Phe17到Phe41）。由于牛乳鐵蛋白肽具有強大的廣譜抗菌活性，它在異源表達時對宿主（如大腸桿菌細胞）有很強的毒害作用。本實驗的目的是建立一種有效的大腸桿菌原核表達系統(tǒng)，獲得無活性的或者無毒害作用的牛乳鐵蛋白肽前體。我們合成了牛乳鐵蛋白（包含乳鐵蛋白肽片段）的DNA片段，可編碼牛乳鐵蛋白氮

2、端的121個氨基酸。該DNA片段重組到表達載體pET-30a(+)上，重組子轉(zhuǎn)入大腸桿菌Rosetta(DE3)細胞中。IPTG誘導表達，SDS-PAGE電泳顯示，轉(zhuǎn)化子表達了一條大約19.2kDa的牛乳鐵蛋白片段，表達量約占宿主蛋白總表達量的30％，用Ni Sepharose HighPerformance親和層析柱純化重組蛋白，目的蛋白經(jīng)SDS-PAGE檢測后仍可見清晰的重組表達產(chǎn)物，與預期目的蛋白產(chǎn)物大小基本相符。然后用胃蛋白酶消