水稻灌漿初期高溫脅迫下的籽粒全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、前期研究中，本課題組采用基因差異顯示技術(shù)和比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法獲得了與水稻灌漿期應(yīng)答高溫?zé)岷τ嘘P(guān)的54個(gè)差異表達(dá)基因片段和21個(gè)差異表達(dá)蛋白，但是54差異表達(dá)基因片段和21個(gè)差異表達(dá)蛋白并非mRNA全長(zhǎng)，為獲得mRNA全長(zhǎng)構(gòu)建水稻灌漿初期高溫脅迫下的籽粒全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)。本文以高溫脅迫條件和常溫對(duì)照條件下的水稻籽?；旌蠘悠罚肅lontech公司生產(chǎn)的SMART PCR cDNA SynthesisKit反轉(zhuǎn)試劑盒合成雙鏈cDNA;通過(guò)

2、分段回收和純化cDNA后，克隆到T載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α;通過(guò)單克隆挑取和培養(yǎng)，獲得了7974個(gè)陽(yáng)性克隆，其中插入目的cDNA片段大于1.0 kb的克隆有5074個(gè)，占克隆總數(shù)的63.6％;插入目的片段小于1.0 kb的克隆數(shù)為2900個(gè)、占克隆總數(shù)的36.4％。
　　 隨機(jī)挑取其中34個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在Genbank的水稻EST數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，結(jié)果顯示插入目的片段大于1.0 kb的克隆中，75％為水稻EST數(shù)據(jù)庫(kù)中最長(zhǎng)

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