稻瘟病菌若干假定泛素E3連接酶基因的功能研究.pdf

1、泛素化修飾是轉(zhuǎn)錄后的修飾方式之一，是蛋白質(zhì)降解的信號(hào)，泛素E3連接酶是泛素化進(jìn)程中的關(guān)鍵酶之一。泛素E3連接酶與細(xì)胞周期調(diào)控、腫瘤發(fā)生、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞免疫、生長(zhǎng)發(fā)育、炎癥反應(yīng)以及調(diào)控DNA的復(fù)制與修復(fù)等密切相關(guān)。
　　 本研究試圖了解稻瘟病菌中泛素E3連接酶家族蛋白的功能。首先，利用稻瘟病菌的基因組數(shù)據(jù)庫(kù)和相關(guān)的生物信息學(xué)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果表明在稻瘟病菌基因組中預(yù)測(cè)有11個(gè)泛素E3連接酶家族成員，這些E3連接

2、酶家族成員都具有其保守的結(jié)構(gòu)域。然后利用同源重組的原理，構(gòu)建基因敲除載體，轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體，成功獲得了4個(gè)基因的敲除突變體。對(duì)4個(gè)基因的突變體進(jìn)行表型分析，發(fā)現(xiàn)四個(gè)基因敲除突變體的菌絲生長(zhǎng)速度均減慢，其中Mgg_03841.6和Mgg_03252.6基因敲除突變體的產(chǎn)孢量均顯著下降、孢子萌發(fā)有稍微的延遲、附著胞形成嚴(yán)重滯后以及對(duì)洋蔥的侵染能力下降。觀察還發(fā)現(xiàn)，Mgg_03841.6和Mgg_03252.6基因敲除突變體致病性嚴(yán)重減弱。這些結(jié)