護理班常用免疫學(xué)檢查

1、3/14/2024,臨床常用免疫學(xué)檢查,,3/14/2024,臨床常用免疫學(xué)檢查包括,一、血清免疫球蛋白檢測二、血清補體檢測三、細胞免疫檢測四、腫瘤標志物檢測五、自身抗體檢測六、感染免疫檢測,3/14/2024,教學(xué)目的與要求：,了解掌握臨床免疫學(xué)檢查的主要內(nèi)容、檢測原理以及臨床實際應(yīng)用的重要意義,3/14/2024,重點與難點,各種抗體的特點補體定義及CH50測定腫瘤標志物及其特異性，AFP與CEA的特點，各種類型的特異

2、性自身抗體與自身免疫的關(guān)系及各類型自身抗體檢測的方法及臨床意義乙肝五項測定以及臨床意義,3/14/2024,臨床常用免疫學(xué)檢查包括,一、血清免疫球蛋白檢測二、血清補體檢測三、腫瘤標志物檢測四、自身抗體檢測五、感染免疫檢測,3/14/2024,免疫球蛋白（Ig）,定義：是由漿細胞合成分泌的一組具有抗體活性的球蛋白，存在于機體的血液、體液、外分泌液和部分細胞的膜上。檢測：感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的診斷、鑒別診

3、斷、疾病進展和預(yù)后。,3/14/2024,血清免疫球蛋白分類,根據(jù)重鏈穩(wěn)定區(qū)的分子結(jié)構(gòu)和抗原特異性的不同，分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE,3/14/2024,血清免疫球蛋白分類,3/14/2024,檢測方法,酶聯(lián)免疫法（ELISA)放射免疫（RIA)熒光標記免疫(IFA)化學(xué)發(fā)光法（CLIA)免疫透射比濁、免疫散射比濁,3/14/2024,血清免疫球蛋白G檢測,IgG人體內(nèi)含量最多，占Ig的70％-80％再次

4、免疫應(yīng)答的主要抗體對細菌、病毒和寄生蟲都有抗體活性唯一可通過胎盤的Ig,3/14/2024,參考值,7.0—16.6 g/L,3/14/2024,臨床意義--IgG 增高,多克隆性增高 見于各種慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺結(jié)核、鏈球菌感染以及自身免疫性疾病單克隆性增高 僅見一種Ig增高，主要見于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多發(fā)性骨髓瘤,3/14/2024,臨床意義--IgG 降低,見于各種先天性和獲得性免疫缺陷病、聯(lián)合免疫

5、缺陷病、也見于重鏈病、輕鏈病、腎病綜合癥、病毒感染和免疫抑制劑患者,3/14/2024,免疫球蛋白A檢測,兩型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。,血清型IgA以單體形式存在,分泌型IgA（S IgA）由J鏈連接的二聚體和分泌片組成。,3/14/2024,參考值,血清IgA 0.7～3.5 g/L， IgA占10％-15％。SIgA 唾液0.3 g/L，淚液30~80 g/L，初乳5.06 g/L，糞便1.3 g/L,3/

6、14/2024,臨床意義,IgA增高 見于IgA型MM，SLE,類風濕性關(guān)節(jié)炎，肝硬化，濕疹和腎臟疾病等IgA降低 見于反復(fù)呼吸道感染，非IgA型MM，重鏈病，輕鏈病，原發(fā)和繼發(fā)性免疫缺陷病和自身免疫性疾病,3/14/2024,免疫球蛋白M檢測,IgM是五聚體，分子量最大的Ig不能通過血管壁，不能通過胎盤個體發(fā)育過程中最早合成的抗體，臍帶血IgM增高提示胎兒宮內(nèi)感染體液免疫應(yīng)答中IgM是最早產(chǎn)生的抗體,3/14/2024,3

7、/14/2024,參考值,參考值 0.5 ～2.6 g/L,3/14/2024,臨床意義,IgM增高 見于初期病毒性肝炎、肝硬化、類風濕關(guān)節(jié)炎、SLE等，原發(fā)性巨球蛋白血癥時， IgM呈單克隆性明顯增高IgM降低 見于IgG型重鏈病， IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制劑，淋巴系統(tǒng)腫瘤和腎病綜合癥。,3/14/2024,免疫球蛋白E的檢測,IgE是血清中最少的一種Ig，占血清總Ig的0.002%。是一種親細胞抗體，介導(dǎo)

8、Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，與變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲感染和皮膚過敏等有關(guān)。,3/14/2024,參考值,ELISA法為0.1 ～0.9m g/L,3/14/2024,臨床意義,IgE增高 見于IgE型MM、重鏈病、肝臟病、結(jié)節(jié)病、類風濕性關(guān)節(jié)炎，以及各種過敏性疾病和寄生蟲感染等。IgE降低 見于先天性和獲得性丙種球蛋白缺乏癥、惡性腫瘤、長期應(yīng)用免疫抑制劑和共濟失調(diào)性毛細血管擴展癥等。,3/14/2024,血清M蛋白,M蛋白(M protein)或稱單

9、克隆免疫球蛋白，是一種單克隆B細胞增殖產(chǎn)生的具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。,3/14/2024,【參考值】蛋白電泳法、免疫比濁法或免疫電泳法：正常人為陰性。,圖1－4號為多發(fā)性骨髓瘤病人的血清蛋白電泳圖譜,,3/14/2024,,【臨床意義】檢測到M蛋白，提示單克隆免疫球蛋白增殖病。見于：①多發(fā)性骨髓瘤：以IgG型最常見，其次為IgA型，IgD和IgE罕見，也有IgM型的報道。,3/14/2024,多發(fā)性骨髓瘤

10、（multiple myeloma）是漿細胞異常增生的惡性腫瘤，也稱漿細胞瘤（plasnocytoma），因其引起骨破壞而得名。患者常伴有貧血、腎功損害和免疫功能障礙。男性多發(fā)，男女比約為2:1，平均發(fā)病年齡是46.5歲。,3/14/2024,,,,多發(fā)性骨髓瘤患者骨破壞所致頭顱腫物及眼球突出,3/14/2024,,②巨球蛋白血癥(macroglobulinemia)：該病血液中存在大量單克隆IgM。③重鏈?。撼霈F(xiàn)Ig重鏈④輕鏈?。?/p>

11、出現(xiàn)單克隆游離輕鏈。⑤半分子病：系由一條重鏈和一條輕鏈組成的單克隆Ig片段。⑥惡性淋巴瘤：血液中可出現(xiàn)M蛋白。⑦良性M蛋白血癥：,3/14/2024,臨床常用免疫學(xué)檢查包括,一、血清免疫球蛋白檢測二、血清補體檢測三、腫瘤標志物檢測四、自身抗體檢測五、感染免疫檢測,3/14/2024,補體（Complement）,補體是一組具有酶源活性的糖蛋白，由傳統(tǒng)途徑的九種成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途徑的三種成分及其

12、衍生物B/D/P/H/I等因子組成參與機體的抗感染和免疫調(diào)節(jié),介導(dǎo)病理反應(yīng),3/14/2024,補體的三條激活途徑,3/14/2024,總補體溶血活性檢測(CH50),原理:抗體致敏的綿羊紅細胞(抗原抗體復(fù)合物)可激活血清中的補體C1,從而引起補體經(jīng)典途徑的連鎖反應(yīng),導(dǎo)致綿羊紅細胞膜上形成多分子的聚合物，綿羊紅細胞溶解。在分光光度計上542nm讀取吸光度。溶解程度與樣品中補體量正相關(guān)。主要反應(yīng)補體經(jīng)典途徑的綜合水平。,3/14/20

13、24,+,,+,C,,一、溶細胞作用：,靶細胞,抗 體,抗原抗體 復(fù)合物,C1--C9,靶細胞溶 解,,,3/14/2024,,,C4,細胞膜,識 別 階 段,3/14/2024,,C3轉(zhuǎn)化酶的形成,C4b,,Mg++,C4a,,,C2,活化階段,3/14/2024,,C5轉(zhuǎn)化酶的形成,C4b,,Mg++,C4a,,,,C2a,C3,C4b2b3b 是C5 轉(zhuǎn)化酶; 它導(dǎo)致膜攻擊復(fù)合體(MAC)的形成,,活化階

14、段,3/14/2024,C5,,3/14/2024,,C6,膜攻擊階段,3/14/2024,,MAC形成并插入到細胞內(nèi),C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,,3/14/2024,CH50,在50%溶血附近，“S”形曲線最陡，接近一條直線。在此范圍內(nèi)補體活性稍有變動，溶血程度就有明顯變化，即是以50%溶血作為反應(yīng)的終點比以100%溶血作為終點更為敏感，因而該試驗被稱為補體50%溶血試驗（complem

15、ent hemolysis 50%） ，即CH50試驗。,3/14/2024,CH50測定的臨床意義,增高：見于急性炎癥，組織損傷和某些惡性腫瘤。減低：免疫復(fù)合物性疾病（如腎小球腎炎）、自身免疫性疾病活動期、感染性心內(nèi)膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重癥營養(yǎng)不良和遺傳性補體成分缺乏癥等,3/14/2024,補體C3檢測,是一種由肝臟合成的β2-球蛋白。C3在補體系統(tǒng)各成分中含量最多，是經(jīng)典途徑和旁路途徑的關(guān)鍵物質(zhì)。它也是一種急性時

16、相反應(yīng)蛋白。 【參考值】 成人血清C3：O．8～1．5g／L。,3/14/2024,,【臨床意義】    (1)增高：常見于一些急性時相反應(yīng)，如急性炎癥、傳染病早期、腫瘤、排異反應(yīng)、急性組織損傷。    (2)減低：見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風濕性關(guān)節(jié)炎活動期、大多數(shù)腎小球腎炎(如鏈球菌感染后腎小球炎、狼瘡性腎炎、基底膜增殖性腎小球腎炎)、慢性活動性肝炎、慢性肝病、肝硬化、

17、肝壞死、先天性補體缺乏(如遺傳性C3缺乏癥)等。它們或是由于消耗或丟失過多或是由于合成能力降低造成。,3/14/2024,臨床常用免疫學(xué)檢查包括,一、血清免疫球蛋白檢測二、血清補體檢測三、腫瘤標志物檢測四、自身抗體檢測五、感染免疫檢測,3/14/2024,腫瘤標志物,腫瘤標志物（tumor marker、TM）：　 在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，由腫瘤細胞所產(chǎn)生或機體在腫瘤細胞刺激下產(chǎn)生的，與腫瘤存在相關(guān)的物質(zhì)，存在于血液

18、、細胞、組織液、體液中。,3/14/2024,,,,,2008年我國衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展統(tǒng)計公報 衛(wèi)生部統(tǒng)計信息中心,3/14/2024,腫瘤的發(fā)展與診斷,,10-100 g,,,,榛子大小,,針頭大小,,免疫學(xué)方法,早期,,亞臨床階段,晚期,,1 mg,1 µg,1kg,1 g,,,,,,,,,,,,,,高靈敏度的腫瘤標志物的測定對腫瘤的早期診斷和治療方案設(shè)計是十分重要的手段,世界衛(wèi)生組織（WHO）指出：若能早期診斷并及時治療

19、，90%～95%的腫瘤是可以治愈的。,,臨床可檢測的腫瘤,腫瘤標記物 (無形的腫瘤),3/14/2024,·,一般腫瘤細胞在癌前病變時，會產(chǎn)生表達腫瘤異常蛋白質(zhì)，多數(shù)腫瘤從癌前病變發(fā)展到0.5 cm 以上的占位性病變需要 5 y～10 y的時間。如果能夠在這段時間內(nèi)運用腫瘤標志物檢測技術(shù)，早期檢測到患者血液中腫瘤所表達的異常蛋白質(zhì)，就可以早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷，并獲得早期治療的良好效果。,3/14/2024,,惡性腫瘤增長的檢測,

20、Tumor mass,1µg,10³,1mg,106,1g,109,,10-100g,1010-11,,1kg,1012,,,,,腫瘤標記物 (無形的腫瘤),臨床可檢測的腫瘤,腫瘤增長,Tumor cells,Lead time,,,世界衛(wèi)生組織（WHO）指出：若能早期診斷并及時治療，90%～95%的腫瘤是可以治愈的。,3/14/2024,腫瘤標志物免疫分析,現(xiàn)實的腫瘤標志物靈敏度有限；特異性有限；存在正常異

21、常交錯；存在不穩(wěn)定性與臨床表現(xiàn)存在差異,理想的腫瘤標志物腫瘤患者血液中含量明顯增高；與腫瘤組織的定位有關(guān)；腫瘤標志物的含量與腫瘤的大小分期有關(guān)；腫瘤標志物的含量與腫瘤的生長、消退或轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)有關(guān)；假陰性率與假陽性率低。,3/14/2024,TM分類,蛋白質(zhì)類，如AFP、CEA和PSA等。糖脂類，如CA19-9和CA-50等酶類，如PAP、NSE和AFU等。激素，如HCG、雌激素受體等其它 腫瘤標志物，如核酸、多胺等

22、。,3/14/2024,腫瘤標志物檢測方法,3/14/2024,化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng),3/14/2024,臨床常用腫瘤標志物,3/14/2024,1.蛋白質(zhì)類腫瘤標志物檢測,3/14/2024,甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）,在胎兒發(fā)育早期,由肝臟和卵黃囊合成，出生后一年內(nèi)降至正常水平。細胞惡變后又重新具有分泌AFP的能力。對診斷肝細胞癌及滋養(yǎng)細胞惡性腫瘤有重要的臨床價值。,3/14/2024,參考值,血清 <

23、 25μg/L,3/14/2024,臨床意義,原發(fā)性肝癌患者血清中AFP的含量明顯升高，常>300μg/L。　病毒性肝炎與肝硬化患者血清中AFP可增高，但常?300μg/L。　生殖器胚胎性腫瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFP可升高?！∪焉飼rAFP可升高，峰值低于400μg/L，若異常升高應(yīng)考慮胎兒神經(jīng)管缺損畸形。,3/14/2024,癌胚抗原（carcinoembryonic antigen、CEA）,早期胎兒的胃腸道及某些組

24、織均有合成CEA的能力胎兒出生后血清 CEA的含量極低,3/14/2024,參考值,血清 < 5μg/L,3/14/2024,臨床意義,升高主要見于胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、乳腺癌、胃癌等消化系統(tǒng)腫瘤。血清CEA連續(xù)隨訪檢測，可用于惡性腫瘤治療后的療效觀察及預(yù)后判斷。病情好轉(zhuǎn)時，CEA濃度下降，病情加重時可升高。腸道憩室炎，直腸息肉，結(jié)腸炎，肝硬化，肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高。抽煙,3/14/2024,前列腺特異性抗原

25、（PSA),前列腺分泌的單鏈糖蛋白存在于前列腺管道的上皮細胞，前列腺癌時血清水平明顯升高總PSA (t-PSA）中，80％結(jié)合形式，20％游離（ f-PSA)參考值： t-PSA0.25,3/14/2024,臨床意義,前列腺癌是60-90％患者血清t-PSA明顯升高前列腺炎、增生，輕度升高， t-PSA 4.0-10.0μg/L t-PSA 4.0-10.0μg/L ， f-PSA /t-PSA 的比值對診斷更有價值，f-PS

26、A /t-PSA﹤0.1時提示前列腺癌,3/14/2024,2.糖脂類腫瘤標志物檢測,腫瘤細胞內(nèi)糖基化過程發(fā)生變異，從而導(dǎo)致細胞分泌性或細胞膜上的糖蛋白或糖脂中的糖基序列發(fā)生改變，形成了一種和正常糖蛋白不同的特殊抗原，可利用單克隆抗體技術(shù)檢測這些抗原，結(jié)果誕生了糖蛋白類抗原。作為新一代的腫瘤標記物，遠較酶和激素類標記物敏感、特異。,3/14/2024,CA125,糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原，存在于上皮性卵巢組織及患者血清中,3/14/202

27、4,CA-125在卵巢診斷中的應(yīng)用,80～90％的卵巢上皮癌中CA-125可明顯升高子宮內(nèi)膜癌、透明細胞癌、輸卵管癌及未分化卵巢癌患者中CA-125含量也可明顯升高粘液性卵巢癌患者的陽性率則較低CA-125在卵巢包塊良惡性的鑒別上特別有價值，敏感度為78％、特異性95％、陽性預(yù)測價值82％、陰性預(yù)測價值91 ％ 。 CA-125和CEA聯(lián)合測定，計算兩者比值，可提高卵巢癌檢出的敏感性和特異性。,3/14/2024,其他應(yīng)用,非卵

28、巢癌類的惡性腫瘤，如胰腺、肝、胃、腸、子宮、和乳腺癌癥患者中CA-125的陽性率可分別高達73％、70％、53％、27％、22％和20％。然而CA-125血清濃度輕微上升還可見于1％健康婦女，3～6％的良性卵巢疾患或非腫瘤患者，包括孕期起始3個月、行經(jīng)期、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維變性、子宮肌瘤、良性卵巢瘤、急性輸卵管炎、急性胰腺炎、肝病、胸腹膜和心包感染等。應(yīng)注意排除 。,3/14/2024,二、CA19-9,為唾液酸化的Ⅰ型乳糖系巖藻

29、五糖，有六個糖基組成 正常在胰腺導(dǎo)管、膽道、胃、腸、子宮內(nèi)膜和涎腺上皮細胞中均有表達,3/14/2024,CA19-9的應(yīng)用,CA19-9的器官特異性不強在各種腺癌特別是消化系統(tǒng)的惡性腫瘤如： 71～93％胰腺癌、67％肝膽管癌、40～50％胃癌、30～50％肝癌、30％直腸癌和15％乳腺癌的CA19-9都有升高在急性胰腺炎、膽汁淤積性膽管炎、膽道結(jié)石和肝臟疾患中CA19-9也有可能升高，但很少超過120kU/L，往往是呈“一過性

30、”升高。,3/14/2024,CA19-9在胰腺癌中的應(yīng)用,CA19-9在胰腺癌中的陽性率最高，常被認為是針對胰腺癌的一種腫瘤標記物。早期胰腺癌CA19-9敏感性較低， T1期為60.7％、T2期為78.4％ 檢測胰腺癌的治療效果及術(shù)后復(fù)發(fā)情況,3/14/2024,CA15-3,分子量約為40 000的糖蛋白是抗原決定簇、糖和多肽組成的糖蛋白,3/14/2024,臨床意義 :,CA15-3作為乳腺癌的主要標記物 23％的原發(fā)性

31、乳腺癌和69％轉(zhuǎn)移性乳腺癌可有 CA15-3的升高乳腺癌的Ⅰ期和Ⅱ期，僅有10～20％的病人有升高，所以不能用于乳腺癌的早期診斷主要用于乳腺癌病人的治療監(jiān)測和預(yù)后判斷。乳腺癌患者血清CA15-3濃度比原來水平升高預(yù)示病情進展、腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，其濃度升高比臨床癥狀出現(xiàn)或影像學(xué)檢查的發(fā)現(xiàn)時間早。對晚期病人，當CA15-3>100 kU/L 時，肯定有轉(zhuǎn)移，敏感性高于CEA、TPA。,3/14/2024,,80％的胰腺癌、71％

32、的肺癌、68％的乳腺癌、64％的卵巢癌、63％的直腸癌、28％的肝癌中也可見到CA15-3的升高5.5％的正常人、一些良性肝病和良性乳腺?。?6％）也可見有 CA15-3的升高,3/14/2024,其它重要的腫瘤標志物,名稱 生化特性 相關(guān)腫瘤CA15-3 糖蛋白 乳腺癌、肺癌、腎癌、卵巢癌、結(jié)腸癌CA125

33、糖蛋白 卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、肺癌CA72-4 糖蛋白 胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、非小細胞性肺癌SCC 糖蛋白 子宮頸癌、肺鱗癌、頭頸部鱗癌TPA 蛋白質(zhì) 膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌,,,,3/14/2024,腫瘤標志物的合理選用,同一種腫瘤可含多種標志物，而一種標志物可出現(xiàn)在多

34、種腫瘤。選擇特異標志物或最佳組合有利于提高腫瘤診斷的陽性率。動態(tài)檢測有利于良性和惡性腫瘤的鑒別，也有利于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷。胃癌：CEA+CA199乳腺癌：CA153+CEA+CA199卵巢癌：CA125+CA724+TPS+AFP,3/14/2024,臨床常用免疫學(xué)檢查包括,一、血清免疫球蛋白檢測二、血清補體檢測三、腫瘤標志物檢測四、自身抗體檢測五、感染免疫檢測,3/14/2024,自身免疫病檢測,正常情況下，機體免

35、疫系統(tǒng)對自身抗原物質(zhì)不產(chǎn)生免疫應(yīng)答或只產(chǎn)生極微弱的免疫應(yīng)答自身免疫性疾病是指機體免疫功能紊亂時,針對自身組織抗原產(chǎn)生自身抗體或致敏淋巴細胞,并導(dǎo)致組織損傷而引起的疾病.如SLE、RA、MCTD等。自身免疫性疾病主要免疫學(xué)特征為血清或其它體液中出現(xiàn)高滴度的自身抗體和致敏淋巴細胞,因此通過對自身抗體的檢測輔助自身免疫性疾病的診斷.,3/14/2024,類風濕因子(rehumatoid factor ,RF),RF是變性IgG刺激機體產(chǎn)

36、生的一種自身抗體，是一種以變性IgG的作為靶抗原的自身抗體。RF主要為IgM型抗體, 但也有 IgG, IgA IgD、IgE型抗體。存在于類風濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液內(nèi)。,3/14/2024,檢測方法與參考值,乳膠致敏凝集實驗：<1:10為陰性。酶連免疫吸附實驗（ELISA）：陰性。速率散射比濁法：<30KIU/L,3/14/2024,臨床意義,類風濕性關(guān)節(jié)炎患者RF的陽性率為52%-92%，平均為70%。

37、RF的量或滴度與疾病的嚴重程度不平行，但與疾病的活動性有關(guān)。IgG型與患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)外癥狀有關(guān)，IgM型與IgA型的效價與骨質(zhì)破壞有關(guān)。RF的特異性不強，在其他結(jié)締組織病也有一定的陽性率，如SLE、硬皮病和皮肌炎、干燥綜合征、慢性活動性肝炎等患者等。不過RF的含量相對較低，且持續(xù)時間較短。,3/14/2024,抗核抗體(antinuclear antibody,ANA),經(jīng)典ANA：是一類以細胞核成分為靶抗原的自身抗

38、體的總稱。 廣義ANA：整個細胞成分，包括細胞核和細胞漿。 無器官與種屬的特異性。主要是IgG.檢測方法：間接免疫熒光法（IIF),3/14/2024,,,核仁型,核仁型：抗核小體抗體，多見于硬皮病、皮肌炎及類分關(guān)等,3/14/2024,,均質(zhì)型,均質(zhì)型：抗DNP或抗組蛋白抗體，也可是多種自身抗體高度密集的形態(tài)表現(xiàn)。多見于活動期SLE、藥物性狼瘡等。,3/14/2024,,邊緣型,是抗dsDNA或抗脫氧核糖核蛋白的

39、形態(tài)學(xué)反應(yīng)。高滴度周邊型核熒光多見于SLE。,3/14/2024,,,顆粒型,：抗ENA抗體。,抗ENA抗體,3/14/2024,臨床意義,未經(jīng)治療的系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的ANA陽性率在90%以上，因此ANA對SLE的診斷具有較高的靈敏度。ANA滴度或量與SLE的活動性平行，因此ANA是判斷SLE活動與否的指標之一。其它自身免疫病ANA也可陽性，如全身性硬皮病的陽性率為約為85~95%，類風濕關(guān)節(jié)炎約為20%。,3/14/2

40、024,可提取核抗原 (Extractable nuclear antigen ,ENA)多肽抗體譜,ENA又稱鹽水可溶性抗原或磷酸鹽可浸出抗原，是指在鹽水中或磷酸鹽可溶解的核抗原。ENA多肽抗體譜是針對核內(nèi)ENA的一類自身抗體，約有10余種，主要為抗核糖核蛋白(RNP)抗體和抗Sm抗體，其它還有抗SS-A抗體、抗SS-B抗體、抗Scl-70抗體、抗JO-1抗體等。不同的自身免疫病可產(chǎn)生不同的抗ENA抗體。通過檢測抗ENA抗體的類型

41、及其組合，可綜合診斷自身免疫病的類型。,3/14/2024,檢測方法,免疫印跡技術(shù)（最常用）,3/14/2024,免疫印跡技術(shù)（最常用）,先將ENA混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區(qū)帶，然后把這些區(qū)帶轉(zhuǎn)印到硝酸纖維膜上，加入待檢血清，最后用酶標抗體使相應(yīng)的抗原帶顯色，在硝酸纖維膜上呈現(xiàn)特異性顯色條帶。參照各種已知陽性血清在膜上留下的顯色區(qū)帶的位置特征及顯色區(qū)帶對應(yīng)的蛋白多肽抗原的分子特征，即可檢測和識別多種自身抗體。,3/14/2024

42、,動物胸腺提取ENA SDS-PAGE 電轉(zhuǎn)移至硝酸纖微膜 加標本 加酶標抗體 判斷結(jié)果,,,,,,3/14/2024,,,3/14/2024,,3/14/2024,臨床意義,抗RNP抗體陽性見于多種風濕性疾病，如MCTD、SLE

43、、系統(tǒng)性硬化病、皮肌炎等，以MCTD的陽性率最高，約為95-100%，且抗體的滴度亦高，故此抗體對MCTD有較高的診斷價值?？笿O-1抗體陽性對多發(fā)性肌炎與皮肌炎的診斷有一定的價值。,3/14/2024,臨床意義,抗Sm抗體主要見于SLE及其重疊綜合征，在SLE的非活動期亦可檢出，是SLE的特異性標志抗體之一，陽性率約為30-40%，而其它疾病鮮見陽性。若聯(lián)合檢測抗ds-DNA和抗Sm抗體可提高SLE診斷的準確性?？筊ib抗體陽性主

44、要見于SLE，為SLE的又一標志抗體，,3/14/2024,臨床意義,抗SS-A、抗SS-B抗體陽性多見于干燥綜合征及合并SLE的干燥綜合征，偶見MCTD，因此抗SS-A、抗SS-B抗體為干燥綜合征的標志抗體?？筍cl-70抗體為進行性全身硬化的標志抗體。特異地出現(xiàn)于該病患者的血清中，陽性多伴有肺纖維化，局限性硬皮病該抗體常陰性。,3/14/2024,抗脫氧核糖核酸抗體（anti-DNA antibody）,抗DNA抗體分為：（1

45、）抗雙鏈 DNA（double stranded DNA, ds-DNA）抗體；（2）抗單鏈DNA （single stranded DNA, ss-DNA）抗體；（3）抗Z-DNA抗體,3/14/2024,檢測方法與參考值,檢測抗ds—DNA抗體最特異和最敏感的方法是用馬疫錐蟲或綠蠅短膜蟲作為抗原基質(zhì)進行間接免疫熒光測定。,3/14/2024,臨床意義,1．抗ds—DNA抗體陽性 見于活動期SLE，陽性率70％～90％。本試驗特異

46、性較高，但敏感性較低。    2．抗ss—DNA抗體陽性 見于SLE(陽性率70％～95％)，尤其是合并有狼瘡性腎炎。還可見于一些重疊結(jié)締組織病、藥物誘導(dǎo)的狼瘡和慢性活動行肝炎等，但不具特異性。,3/14/2024,抗ss-DNA抗體的臨床意義,抗ss-DNA抗體陽性：SLE尤其合并狼瘡腎炎的SLE，但無特異性。其他的自身免疫病如藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡、MCTD和慢性活動性肝炎可出現(xiàn)較高的陽性率。與ANA

47、比較，抗ss-DNA抗體的檢測不能提供更進一步的信息。,3/14/2024,臨床常用免疫學(xué)檢查包括,一、血清免疫球蛋白檢測二、血清補體檢測三、細胞免疫檢測四、腫瘤標志物檢測五、自身抗體檢測六、感染免疫檢測,3/14/2024,病毒感染免疫檢測,3/14/2024,TORCH,T =Toxop asma，弓形蟲O=other(syphilis),其它病毒R= Rubella Virus，風疹病毒C= Cytomegalo

48、virus，巨細胞病毒H= Herpes simplex，單純皰疹病毒，因此命名為TORCH檢查為婦產(chǎn)科產(chǎn)前的常規(guī)檢查項目,,3/14/2024,TORCH檢測的意義,由于成人TORCH感染的臨床癥狀不明顯，無法自我感覺到是否受到感染，因此孕前及孕早期診斷對優(yōu)生優(yōu)育十分重要。 目前，國際上公認的最方便、最先進的早期診斷方法是檢測人體血清中的特異性IgM、IgG抗體，以判斷受到感染的情況。 世界上許多發(fā)達國家已經(jīng)將TORCH

49、列為孕期常規(guī)檢查項目，在優(yōu)生優(yōu)育方面發(fā)揮著重要作用。在國內(nèi)，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人民生活水平的提高，人們對優(yōu)生優(yōu)育的認識逐步提高，TORCH檢測越來越受到重視。,3/14/2024,造成孕婦流產(chǎn)、死胎，出生后有嚴重的智力障礙，生活不能自理，造成極大的精神及經(jīng)濟負擔。,3/14/2024,臨床意義,TORCH感染后，患者特異性抗體IgM、IgG可迅速升高，IgM出現(xiàn)早，可持續(xù)6-12周，而IgG出現(xiàn)晚，但可維持終生。因此，我們常把IgG陽

50、性看作是既往感染，而IgM陽性則做為初次感染的診斷指標。 1、IgG陽性IgM陰性 　　曾經(jīng)感染過這種病毒，或接種過疫苗，并且已產(chǎn)生免疫力，胎寶寶感染的可能性很小。 2、 IgG陰性IgM陰性 　　表明孕婦為易感人群。妊娠期最好重復(fù)IgG檢查，觀察是否陽轉(zhuǎn)。 3、 IgG陽性IgM陽性 　　表明孕婦可能為原發(fā)性感染或再感染。可借IgG親和試驗加以鑒別。 4、IgG陰性IgM陽性 　　近期感染過，或為急性感染；也可能是其它干

51、擾因素造成的IgM假陽性。需2周后復(fù)查，如IgG陽轉(zhuǎn)，為急性感染，否則判斷為假陽性。,3/14/2024,(五)輪狀病毒抗體和RNA測定,普通輪狀病毒主要侵犯嬰幼兒，成人腹瀉輪狀病毒則可引起青壯年胃腸炎的暴發(fā)【參考值】RNA陰性(PCR法)； 抗原陰性(膠乳凝集試驗或ELISA法) IgM和IgG陰性(金標免疫斑點法或ELISA法)。【I臨床意義】嬰幼兒腹瀉約有50％是由輪狀病毒所致，常呈IgM陽性，提示現(xiàn)癥感染

52、；。IgG陽性提示既往感染；PCR檢測輪狀病毒RNA具特異性。,3/14/2024,病毒性肝炎血清標志物檢測,病毒性肝炎的病原體主要為肝炎病毒。目前已明確的肝炎病毒有七型：HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV以及TTV等。病毒性肝炎血清標志物包括：肝炎病毒本身、組成該病毒的成分以及抗病毒抗體等。,3/14/2024,一、甲型肝炎病毒標志物檢測,甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus、HAV）是一種微小核糖核

53、酸病毒，無包膜，核心為單股正鏈RNA。HAV可分為4個基因型，但只有一個血清型，只形成一個抗原抗體系統(tǒng)。HAV為甲型病毒性肝炎的病原體，主要通過糞口途徑傳播。臨床表現(xiàn)為急性黃疸肝炎。,3/14/2024,3/14/2024,標志物名稱 檢測方法 參考值 HAVAg ELISA 陰性抗HAV-IgM ELISA

54、 陰性抗HAV-IgG ELISA 陰性抗HAV-IgA ELISA 陰性 HAV-RNA RT- PCR 陰性,,,,檢測方法與參考值,3/14/2024,3/14/2024,臨床意義,抗HAV - IgM在HAV感染后1-2周內(nèi)出現(xiàn)，早期診斷甲肝的特異指標?？笻AV - IgG是一種保護性抗

55、體，出現(xiàn)于恢復(fù)期并長期存在。陽性表示過去曾受過HAV感染，可用于甲肝的流行病學(xué)調(diào)查。HAV Ag和HAV-RNA是HAV感染直接的證據(jù)，尤以HAV-RNA陽性對早期診斷價值較大。,3/14/2024,乙型肝炎實驗室檢查目的 1. 明確乙型肝炎診斷 2. 了解和研究乙型肝炎的流行病學(xué)調(diào)查 3. 估價病情和主動免疫的效果，觀察療效，判斷預(yù)后 4. 排除HBsAg（+）的獻血員（選擇健康供

56、血者）,3/14/2024,乙型肝炎病毒標志物檢測,乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）為嗜肝DNA病毒，在電鏡下可見大球形顆粒、小球形顆粒和管型顆粒。完整的HBV顆粒為大球形顆粒，又稱 Dane顆粒，直徑42nm，分為包膜與核心兩部分，包膜HBsAg，核心部分含有環(huán)狀雙股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等，是病毒復(fù)制的主體。,3/14/2024,3/14/2024,3/14/2024,3/14/20

57、24,乙肝抗原：1963年美國腫瘤研究所B.S.BIumberg在澳大利亞首先發(fā)現(xiàn)，稱為“澳抗”又稱肝炎相關(guān)抗原。乙肝病毒：1970年英國Dane在電鏡下首先觀察到乙肝病毒顆粒，是直徑42nm的雙層外殼的病毒顆粒，稱為Dane氏顆粒，后來又有人發(fā)現(xiàn)26nm的核心顆粒。e抗原：1972年瑞典人Magnius發(fā)現(xiàn)與乙肝有關(guān)的第三種抗原。e抗原為一種可溶性抗原。在HBV核心的表層,3/14/2024,機體感染HBV后產(chǎn)生相應(yīng)的免疫

58、反應(yīng)，形成多種不同的抗原抗體系統(tǒng)表面抗原抗體系統(tǒng) (HBsAg，抗HBs)核心抗原抗體系統(tǒng) (HBcAg，抗HBc)e 抗原抗體系統(tǒng) (HBeAg，抗HBe)HBV為乙型病毒性肝炎的病原體，血液為其主要的傳播途徑。,3/14/2024,檢測方法與參考值,3/14/2024,臨床意義（1）,HBsAg： 1 .乙型肝炎具有傳染性的標志之一，陽性常見于急性、慢性乙型肝炎，慢活肝。2. 肝硬化、肝癌患者中有相當百分比的病人

59、陽性，此現(xiàn)象說明肝硬化、肝癌患者有傳染乙肝的危險，還說明了乙肝，肝硬化，肝癌發(fā)展演變的內(nèi)在聯(lián)系。乙肝是肝癌的病因之一。3. 血液病患者，反復(fù)輸血檢出率高。4. 乙肝攜帶者：男性>女性，我國攜帶者約6%，這種人雖然沒有臨床癥狀,體檢肝功能正?；蛴休p微損害，有時ALT升高，血中抗-HBS（-），具有一定的傳染性,不應(yīng)作為供血者。可持續(xù)數(shù)周、數(shù)年這種人將來可能發(fā)生慢性活動性肝炎、遷延性肝炎、肝硬化和肝癌值得注意。,3/14/2024

60、,抗-HBs陽性表示：①既往曾感染過HBV，現(xiàn)已恢復(fù)；②接種乙肝疫苗后；③被動性獲得抗-HBs抗體HBeAg： HBeAg陽性表明: 患有乙型肝炎，是病毒復(fù)制活躍，傳染性強的指標，且HBeAg持續(xù)陽性的乙型肝炎，易轉(zhuǎn)變?yōu)槁愿窝?肝硬化。 HBeAg (+) ,HBsAg(+)的孕婦所生的新生兒，母嬰垂直傳播的機會很高，達90%值得重視。抗-HBe陽性意味著 HBV部分被清除或抑制，復(fù)制減少，傳染性降低.但慢性肝炎,肝硬化陽性

61、率高e抗體和e抗原一般不同時存在，e抗原消失，e抗體產(chǎn)生。e抗體（+）說明患者曾出現(xiàn)過HBeAg，但對e抗體（+）者不可視為HBV復(fù)制平息。,3/14/2024,抗-HBc IgM ： 是診斷急性乙型肝炎和判斷病毒復(fù)制活躍的指標，并提示病人血液有強傳染性?？?HBc IgM陽性也可見于慢性活動性肝炎。 抗-HBc IgG ： 高滴度表明機體正感染HBV；而低滴度抗-HBc IgG則是既往感染過HBV的指標，具有流行病學(xué)的意義。(

62、非保護性抗體),3/14/2024,HBV DNA： 是HBV感染最直接，最靈敏和最特異的檢測指標，且血清中HBV DNA的水平可作為治療方案與療效觀察的指標。,HBV DNA定量檢測,3/14/2024,循環(huán)數(shù). 擴增子數(shù) (靶序列拷貝數(shù))122438416532664201,048,576301,073,741,824(10億),目的基因擴增,3/14/2024,乙型肝

63、炎病毒血清標志物的綜合評價,(1) (2) (3) (4) (5) ＋ － ＋ － ＋ 急性或慢性乙型肝炎，高傳染性 ＋ － － － ＋ 急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg攜帶者 ＋ － － ＋ ＋ 急性乙肝趨向恢復(fù)或慢性乙肝，弱傳染性 － ＋ － － ＋ 急性HBV感染康復(fù)期或有既往感染史，有

64、 免疫力 － － － ＋ ＋ 乙肝恢復(fù)期，弱傳染性 － － － － ＋ 急性HBV感染“窗口期”， 或既往曾感染過乙肝 － ＋ － － － 接種HBV疫苗或HBV感染后康復(fù) － ＋ － ＋ ＋ 急性乙肝康復(fù)期，開始產(chǎn)生免疫力－ －

65、 － － － 無HBV感染,3/14/2024,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc + + + + + + + +

66、 + +-,3/14/2024,丙型肝炎病毒標志物,丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV） 由核心和包膜組成。核心含有單鏈正股RNA，包膜由結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)域組成。血液為其主要傳播途徑。病情雖較乙型肝炎輕，但更易轉(zhuǎn)為慢性。,3/14/2024,檢測方法與參考值,標志物

67、 檢測方法 參考值 抗-HCV ELISA 陰性抗-HCV IgM ELISA 陰性抗-HCV IgG ELISA 陰性 HCV-RNA RT-PCR 陰性,,,,3/14/2024,臨床意義（1）,名稱

68、 臨床意義抗-HCV： 一種非保護性抗體，陽性是診斷 HCV感染的重要依據(jù)。 抗-HCV IgM ： 是丙型肝炎活動和具有傳染性的 指標，常見于急性HCV感染。抗-HCV IgG ： 陽性表明體內(nèi)有HCV感染。,,,,3/14/2024,臨床