水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留的快速檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、水產(chǎn)品中的漁藥殘留問(wèn)題是影響水產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要因素，近年來(lái)，漁藥殘留的問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，危害到人類身體健康以及水產(chǎn)品的貿(mào)易交易。因此引起了社會(huì)各界廣泛的關(guān)注。孔雀石綠是漁藥殘留中具有代表性的一種，它的功能團(tuán)三苯甲基可以致癌，所以全球很多癌癥機(jī)構(gòu)都將它列為致癌物。由于孔雀石綠的致癌危害，使得它已成為水中品中最具代表性的漁藥殘留之一。目前很多國(guó)家已經(jīng)明確的禁用孔雀石綠，但是由于魚(yú)類預(yù)防疾病的需要，很多養(yǎng)殖者還是會(huì)在養(yǎng)殖過(guò)程中濫用孔雀石綠這類

2、禁用藥物，伴隨著魚(yú)類的代謝，這些藥物會(huì)沉積在它們體內(nèi)，人類食用了這些孔雀石綠殘留超標(biāo)的魚(yú)肉就會(huì)造成人體的疾病。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法為儀器檢測(cè)法，雖然靈敏度高，但是耗時(shí)長(zhǎng)、操作復(fù)雜，需要專業(yè)人員才能檢測(cè)。為了營(yíng)造一個(gè)良好的水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境，健全一個(gè)質(zhì)量安全的保障體系，本研究著重開(kāi)發(fā)操作簡(jiǎn)單、靈敏快捷、成本低廉的檢測(cè)水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留的技術(shù)和產(chǎn)品。本文主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)論如下:
　　本文的一種研究方法是免疫金銀染色法，用膠體金標(biāo)記孔雀石綠抗體作

3、為標(biāo)記物，檢測(cè)線上是孔雀石綠抗原，質(zhì)控線上是羊抗小鼠二抗，通過(guò)一些列參數(shù)的優(yōu)化，制備膠體金免疫層析試紙條，然后用銀染色增強(qiáng)顯色，從而提高靈敏度。實(shí)驗(yàn)選用的標(biāo)記抗體的膠體金是直徑為20 nm的膠體金，最佳蛋白結(jié)合量是15μg孔雀石綠抗體需要結(jié)合1 mL膠體金。吸取20μL標(biāo)記完成的并稀釋10倍的抗體，固定到玻璃纖維膜上作為金標(biāo)墊。玻璃纖維膜用PBS（0.01 M，10％蔗糖，0.05％吐溫-20）預(yù)處理過(guò)。檢測(cè)線上的抗原濃度是與3 mg/

4、mL，質(zhì)控線上的二抗?jié)舛葹?.7 mg/mL。用免疫金銀染色法放大顯色信號(hào)，制備的試紙條檢出限可達(dá)0.2 ng/mL，并成功用于實(shí)際魚(yú)樣中孔雀石綠的檢測(cè)。本測(cè)試在20 min中內(nèi)可全部完成，室溫下穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，可在室溫環(huán)境下保存90 d，為快速檢測(cè)水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留提供了一個(gè)新的思路。
　　本研究的第二種方法是電化學(xué)方法，用石墨烯修飾玻碳電極，并且在檢測(cè)液中添加表面活性劑增強(qiáng)靈敏度。實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化后的緩沖液pH為7.0、掃描速

5、度0.1 V/s、選擇的表面活性劑SDS濃度為1.2×10-5M、富集時(shí)間350s、富集電壓-0.3 V等。干擾實(shí)驗(yàn)中電流信號(hào)改變小于10％，表明對(duì)MG具有比較好的選擇性。結(jié)果:300倍濃度的Mg2+、Fe2+、Fe3+、Al3+、Na+、K+、Zn2+、Ca2+;200倍濃度的蔗糖、尿素、維生素E;50倍濃度的抗壞血酸、尿酸對(duì)50μg/L的MG電流不產(chǎn)生干擾。當(dāng)MG在7～3000μg/L，MG濃度和氧化峰值電流有比較好的線性關(guān)系。校準(zhǔn)