基于銪離子熒光微球的降鈣素原快速定量檢測方法的建立.pdf

1、背景：降鈣素原（Procalcitonin，PCT）是診斷和監(jiān)測細(xì)菌性炎癥感染的一個重要臨床診斷標(biāo)志物，在全身炎癥綜合反應(yīng)征和膿毒癥患者的治療和監(jiān)測中具有極大的應(yīng)用價值。目前臨床上PCT有多種檢測方法：膠體金層析檢測靈敏度低、特異性不強(qiáng)；酶聯(lián)免疫檢測耗時耗力，操作繁瑣；均相熒光檢測也存在著操作時間長、檢測成本高的缺點(diǎn)。
　　目的：本研究用銪離子熒光微球作為抗體標(biāo)記物，旨在建立一種快速、高靈敏度的降鈣素原免疫層析方法，文中對建立的層

2、析方法進(jìn)行優(yōu)化并對其性能進(jìn)行評價；同時本研究初步探討了銪離子熒光微球在磁分離均相免疫檢測中的應(yīng)用。
　　方法：將PCT單克隆抗體（檢測抗體）和雞IgY標(biāo)記上銪離子熒光微球（Europium(III) chelated microparticle，簡稱Eu-CM），然后處理在熒光結(jié)合墊上；另一株P(guān)CT單克隆抗體（包被抗體）包被于硝酸纖維素膜的檢測線T位置；山羊抗雞IgY抗體包被于硝酸纖維素膜質(zhì)控線 C位置，熒光墊和硝酸纖維素膜組裝組

3、成免疫層析試劑條。血清中的降鈣素原與Eu-CM標(biāo)記的檢測抗體特異性結(jié)合形成抗原抗體反應(yīng)復(fù)合物，反應(yīng)復(fù)合物沿著硝酸纖維素膜前移，在硝酸纖維素膜 T位置形成包被抗體-PCT-檢測抗體-Eu-CM復(fù)合物，在C線位置形成山羊抗雞IgY-雞IgY-Eu-CM復(fù)合物，通過免疫熒光檢測儀檢測T、C位置的熒光信號。用本研究研制的免疫層析試劑條檢測PCT重組抗原，用SigmaPlot12.5分析該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線，空白檢測限，最低檢測限和功能性靈敏度；檢測

4、60份臨床樣本，Deming’s線性回歸法分析該方法與法國梅里埃全自動酶聯(lián)免疫熒光分析系統(tǒng)的相關(guān)性。在磁分離均相系統(tǒng)中，以PCT單克隆抗體標(biāo)記Eu-CM作為檢測抗體，另一株P(guān)CT單克隆抗體標(biāo)記生物素作為固相抗體，偶聯(lián)親和素的磁微球用來分離 Eu-CM-檢測抗體-PCT-固相抗體-生物素復(fù)合物，初步探索Eu-CM在磁分離均相免疫檢測中檢測PCT重組抗原的最低檢測限。
　　結(jié)果：本研究建立了一種基于Eu-CM的降鈣素原免疫層析檢測方法

5、，方法的最佳檢測時間為15 min，免疫層析方法中PCT標(biāo)準(zhǔn)品空白檢測限為0.01 ng/ml，最低檢測限為0.02 ng/ml，檢測范圍0.02-25 ng/ml，功能性檢測靈敏度為0.05 ng/ml（CV<10%）。同法國梅里埃全自動酶聯(lián)免疫熒光分析系統(tǒng)相比，兩種檢測方法間的線性相關(guān)系數(shù)為0.9864（n=60），兩種方法學(xué)具有高度的相關(guān)性。Eu-CM應(yīng)用于磁分離均相免疫檢測中，標(biāo)準(zhǔn)曲線匹配二次函數(shù)，函數(shù)方程為y=19170.12