多肽藥物MMI-0100在阿爾茨海默病小鼠模型中的作用機制研究.pdf

1、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinases，p38MAPK)是MAPK激酶家族之一。已有大量研究報道p38MAPK/MK2信號通路參與調(diào)控細胞應(yīng)激、炎癥、凋亡等。針對該靶點，p38MAPK抑制劑(SB203580等)被開發(fā)研究，但因臨床階段出現(xiàn)的諸多安全隱患（肝毒性、心臟毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性等），限制了其應(yīng)用和發(fā)展。由此，下游底物MK2作為調(diào)控炎癥反應(yīng)的新型藥物靶標(biāo)成為目前研究的

2、熱點；近來設(shè)計合成的多肽藥物MMI-0100是對MK2有抑制作用的外源治療性多肽。且在外周炎癥病變研究中表明有良好功效，基于此，MMI-0100靶向抑制p38MAPK/MK2信號通路可能對神經(jīng)炎癥病變也具有較好的調(diào)控作用。
　　阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是主要影響海馬和皮質(zhì)腦區(qū)的神經(jīng)退行性疾病，病因復(fù)雜不明。但長期慢性的神經(jīng)炎癥反應(yīng)引起神經(jīng)膠質(zhì)細胞持續(xù)激活和炎癥介質(zhì)的連續(xù)釋放是導(dǎo)致神經(jīng)元死亡并形成

3、腦疾病的重要過程。本課題主要觀察MMI-0100能否通過抑制神經(jīng)炎癥減輕小鼠AD模型中的認知損傷。結(jié)果：①采用小鼠新物體(NOR)和新位置(OLR)記憶識別模型，由Aβ42及LPS誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥形成小鼠記憶損傷，發(fā)現(xiàn)給藥MMI-010024h后，小鼠記憶損傷被減緩，并表現(xiàn)出與生理鹽水組無顯著性差異的記憶水平；②通過免疫組化實驗，分析CD11b和GFAP蛋白表達量，確定小鼠海馬中小膠質(zhì)細胞及星形膠質(zhì)細胞參與的炎癥免疫應(yīng)答情況，發(fā)現(xiàn)MMI-0

4、100可以顯著降低LPS引起的CD11b和GFAP的高表達，即MMI-0100能降低CNS中免疫細胞的持續(xù)激活，維持其處于靜息狀態(tài)；③在組織水平，實時定量PCR分析發(fā)現(xiàn)MMI-0100可以顯著降低由Aβ42和LPS誘導(dǎo)的炎癥因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS)高表達，且在Western blot檢測中發(fā)現(xiàn)MMI-0100可通過抑制ERK磷酸化來調(diào)控炎癥反應(yīng)，而p38MAPK可能在海馬組織蛋白提取過程中被降解，因而未能確定其

5、磷酸化水平；④在BV-2細胞系中檢測發(fā)現(xiàn)MMI-0100為10-7M時能夠顯著降低LPS誘導(dǎo)的小鼠神經(jīng)炎癥中炎癥因子(IL-6、IL-1β、iNOS及COX-2)表達，且能夠濃度依賴性的降低ERK和p38MAPK磷酸化水平，表明MMI-0100可能是通過抑制ERK和p38MAPK通路來降低LPS引起的炎癥反應(yīng)；⑤MMI-0100是具有細胞穿膜活性的治療性多肽，有趣的是，鼻黏膜給藥MMI-0100后，由Aβ42和LPS引起的小鼠NOR和O