應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)嬰幼兒奶粉中阪崎腸桿菌（克羅諾桿菌屬）的研究.pdf

1、阪崎腸桿菌(Enterbacter sakazakii)，是寄生在人和動(dòng)物腸道內(nèi)的一種革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，周身鞭毛、能運(yùn)動(dòng)、兼性厭氧。該菌能引起嚴(yán)重的腦膜炎、壞死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥等病癥，可感染各年齡段免疫力低下的人群，尤其是新生兒、早產(chǎn)兒及出生時(shí)身體條件較差的嬰兒，感染后嬰兒死亡率高達(dá)50％以上，是一種重要的食源性條件致病菌。
　　近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外越來(lái)越多的研究表明:嬰幼兒配方奶粉是引起嬰幼兒感染的主要傳染源和傳播媒介。目前，

2、GB法檢測(cè)阪崎腸桿菌主要是基于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)，然后綜合菌落形態(tài)、生化特征等進(jìn)行鑒定。此法操作繁瑣、耗時(shí)耗力、且不易分辨結(jié)果，存在一定假陽(yáng)性。所以近年來(lái)，采用分子生物學(xué)的方法檢測(cè)食源性病菌得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。
　　本論文基于中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN/T1632.3-2013)中阪崎腸桿菌（克羅諾桿菌屬）實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)方法，首先將PCR反應(yīng)各組分預(yù)混成Mix Buffer，大大簡(jiǎn)化了操作步驟，同時(shí)對(duì)各組分

3、濃度及反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)阪崎腸桿菌Real-time PCR的快速檢測(cè)。其次，通過(guò)對(duì)比酚氯仿和加熱裂解兩種DNA提取方法，對(duì)加熱裂解法進(jìn)行了優(yōu)化，并用貝因美奶粉樣本和人工污染樣本進(jìn)行了驗(yàn)證。人工污染奶粉的阪崎腸桿菌的檢出限可達(dá)4.7×103CFU/ml。
　　本文中所有實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)都是在博日公司自主研發(fā)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器平臺(tái)和博日專利產(chǎn)品“標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室”內(nèi)完成，從而初步建立了“試劑、儀器、軟件、PCR污染