抗人類成纖維細胞生長因子受體2(FGFR2)的單鏈抗體的篩選.pdf

1、人類成纖維細胞生長因子受體2（FGFR2）及其配體在胚胎發(fā)育及組織生長中都扮演著重要的角色，對細胞的增殖、分化、遷移等都有著重要的作用。FGFR2-Ⅲb亞型在上皮細胞中表達,有證據(jù)表明FGFR2-Ⅲb的過量表達與癌癥發(fā)展相關。
　　本課題研究的主要內容是通過酵母雙雜交技術從一個單鏈抗體（Single-Chain Variable Fragment，scFv）文庫中篩選出能與FGFR2-Ⅲb胞外段相互作用的scFv，并準備利用哺乳動

2、物雙雜交方法進一步驗證兩者的相互作用。從而為抑制有FGFR2過量表達的腫瘤細胞的增殖以及癌癥治療奠定一定的基礎。
　　本課題的研究主要包括以下幾個方面:
　?。?）從Genbank中查詢FGFR2-Ⅲb基因并獲得能與FGFs結合的胞外段cDNA序列信息，由公司合成cDNA后，將cDNA連接到酵母雙雜交誘餌質粒pGBKT7中，形成pGBKT7-FGFR2；
　?。?）將pGBKT7-FGFR2質粒轉化酵母細胞AH109；

3、
　?。?）擴增含有單鏈抗體cDNA的獵物質粒文庫pSF50-scFv以及提取文庫質粒；
　?。?）將單鏈抗體文庫轉化入已含有pGBKT7-FGFR2的AH109，進行酵母雙雜交實驗；
　?。?）提取陽性AH109克隆的質粒，轉化大腸桿菌DH5α，在氨芐青霉素平板上生長，從而獲得帶有pSF50-scFv的DH5α，提取pSF50-scFv質粒，對陽性克隆的scFv DNA測序并分析和比較抗體片段的DNA序列；
　

4、?。?）將陽性克隆的scFv DNA回轉入已含有pGBKT7-FGFR2質粒的AH109，進一步驗證兩者的相互作用；
　?。?）設計引物將FGFR2胞外段擴增后連接至哺乳動物雙雜交質粒pACT內,設計引物將陽性pSF50-scFv的scFv片段擴增后連接至哺乳動物雙雜交質粒pBIND內，為進行哺乳動物雙雜交實驗做準備，以驗證FGFR2與篩選得到的scFv在哺乳動物細胞中的相互作用。
　　本課題經(jīng)過酵母雙雜交得到18個scFv