成纖維細胞生長因子受體3（FGFR3）在小鼠骨形成過程中作用和機制的研究.pdf

1、目的： FGFR3是骨骼發(fā)育過程中重要的調(diào)控分子，主要通過抑制軟骨細胞增生、分化來抑制軟骨形成過程，其功能增強型點突變可以導(dǎo)致軟骨發(fā)育不全(Achondroplasia，ACH)。同時發(fā)現(xiàn)FGFR3能夠影響骨形成過程，但具體作用和分子機制還不清楚。本研究旨在明確FGFR3是否通過降低軟骨細胞分泌BMP4間接影響骨形成過程。 方法 1．細胞試驗： (1)原代培養(yǎng)ACH、野生型小鼠軟骨細胞和成骨細胞，利用Tr

2、answell<'TM>建立不同基因型軟骨細胞與成骨細胞的共培養(yǎng)模型； (2)利用實時定量PCR技術(shù)分別檢測成骨細胞與不同軟骨細胞共培養(yǎng)后以及單獨培養(yǎng)的成骨細胞中cbfa-1、OP、OC等標記基因的表達差異，同時檢測ACH和野生型軟骨細胞BMP4的表達差異； (3)鑒于BMP2于BMP4有極高同源性，且相互之間功能可以代償，故通過在與ACH軟骨細胞共培養(yǎng)組加入外源性rh-BMP2，定量檢測成骨細胞cbfa-1、OP、OC

3、等成骨標記基因的表達，并與野生型軟骨細胞共培養(yǎng)組及單獨培養(yǎng)的成骨細胞進行比對研究。 2．胚胎脛骨培養(yǎng)試驗： (1)建立小鼠16.5天胚胎脛骨體外培養(yǎng)模型； (2)在培養(yǎng)的ACH胚胎一側(cè)脛骨加入外源性rh-BMP2后，與對側(cè)脛骨比較，從大體測量、藏紅-固綠染色及定量檢測cbfa-1、OP、OC等基因表達評估其骨形成功能，并與培養(yǎng)的對側(cè)脛骨及野生型脛骨進行比對研究。 結(jié)果 1．細胞試驗： 共培

4、養(yǎng)組的成骨細胞標記基因表達均較成骨細胞單獨培養(yǎng)組高，且與ACH軟骨細胞共培養(yǎng)組的成骨細胞cbfa-1、OP、OC等標記基因的表達較與野生型軟骨細胞共培養(yǎng)組明顯降低，表明成骨功能受到抑制。與之相對應(yīng)的是ACH軟骨細胞中BMP4的表達與野生型軟骨細胞相比也明顯降低。在加入外源性的rh-BMP2后，ACH共培養(yǎng)組的成骨細胞cbfa-1、OP、OC等基因的表達水平顯著升高，成骨功能得到恢復(fù)。 2．胚胎脛骨培養(yǎng)試驗： 培養(yǎng)的ACH