成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2（FGFR2）在小鼠骨折愈合過(guò)程中的作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：FGFR2是參與骨骼發(fā)育過(guò)程的重要生長(zhǎng)因子，其功能增強(qiáng)性突變可引起多種類型的骨骼遺傳疾病-囟門早閉。有研究證實(shí)FGFR2參與了骨折愈合過(guò)程，但具體的分子機(jī)制和作用結(jié)果還不清楚。本研究在闡明FGFR2在骨折愈合過(guò)程中時(shí)空表達(dá)模式的基礎(chǔ)上，著重探討FGFR2功能改變對(duì)骨折愈合結(jié)果以及相關(guān)分子表達(dá)的影響。 方法：采用同窩出生的8-9周大小的FGFR2功能降低(基因型為FGFR2-Neo-250MT/WT；簡(jiǎn)稱MT)和功能正常小鼠

2、(野生型；簡(jiǎn)稱WT)，建立脛骨不穩(wěn)定骨折愈合模型，并對(duì)兩組小鼠的骨痂進(jìn)行X線攝片，HE染色，Brdu摻入檢測(cè)，F(xiàn)GFR2、ColⅡ、ColX、Ihh、OC的原位雜交檢測(cè)，Tunel法對(duì)原位凋亡檢測(cè)，在整體、組織、分子水平進(jìn)行對(duì)比研究。 結(jié)果：X線攝片結(jié)果提示：MT和WT小鼠在21天時(shí)都基本愈合，骨折斷端間有硬骨痂連接，即在整體水平上未發(fā)現(xiàn)FGFR2功能減少對(duì)骨折愈合結(jié)果造成明顯影響。 HE染色結(jié)果提示：兩組小鼠在骨折后5

3、天開(kāi)始出現(xiàn)軟骨痂，第7、10天有大量軟骨痂出現(xiàn)，第14天軟骨痂開(kāi)始大量被編織骨替代，第21天時(shí)WT小鼠軟骨痂基本上全部被替代為編織骨，而MT小鼠還殘留少量軟骨痂未被替代。這些結(jié)果表明在組織學(xué)水平上可見(jiàn)MT小鼠愈合速度比WT小鼠略有延遲。 Brdu摻入檢測(cè)細(xì)胞增生和FGFR2、ColⅡ、ColX、Ihh、OC的原位雜交檢測(cè)結(jié)果提示：骨折后第3天，F(xiàn)GFR2表達(dá)在骨折斷端的骨膜下細(xì)胞中，這些細(xì)胞同時(shí)表達(dá)成骨細(xì)胞的標(biāo)記基因OC，WT小

4、鼠的表達(dá)較MT小鼠高，并且增生更明顯，提示FGFR2對(duì)成骨細(xì)胞的增生、分化有促進(jìn)作用。 骨折后第5天，F(xiàn)GFR2在增生的軟骨細(xì)胞中沒(méi)有表達(dá)，這些軟骨細(xì)胞ColⅡ表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，Brdu檢測(cè)發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞增生非?；钴S，WT和MT小鼠之間無(wú)明顯差別。但是，F(xiàn)GFR2在骨膜下的成骨細(xì)胞中明顯表達(dá)，WT小鼠表達(dá)更明顯，并且同OC表達(dá)強(qiáng)度變化趨勢(shì)一致，WT小鼠成骨細(xì)胞增生較MT小鼠明顯。 骨折后第7天，F(xiàn)GFR2與Ihh均表達(dá)于肥大前

5、軟骨細(xì)胞內(nèi)，并且表達(dá)的部位和強(qiáng)度上變化趨勢(shì)非常相似，WT小鼠比MT小鼠表達(dá)更明顯；ColX表達(dá)部位與FGFR2和Ihh有重疊。Brdu檢測(cè)可見(jiàn)WT小鼠軟骨細(xì)胞增生較MT小鼠明顯，與FGFR2和Ihh的強(qiáng)度改變一致，推測(cè)FGFR2可能通過(guò)Ihh抑制肥大前軟骨細(xì)胞分化，促進(jìn)軟骨細(xì)胞增生。 骨折后第10天，F(xiàn)GFR2在肥大軟骨細(xì)胞中表達(dá)，WT小鼠較MT小鼠表達(dá)明顯；Ihh在肥大細(xì)胞中沒(méi)有表達(dá)，但在肥大軟骨細(xì)胞周圍的肥大前軟骨細(xì)胞中有表

6、達(dá)；ColX在肥大前和肥大軟骨細(xì)胞中均有表達(dá)。 骨折后第14天，增生的成骨細(xì)胞開(kāi)始替代凋亡的肥大軟骨細(xì)胞。FGFR2在肥大軟骨細(xì)胞中有表達(dá)，WT較MT小鼠表達(dá)明顯；ColX表達(dá)部位與FGFR2相一致；Brdu結(jié)果提示W(wǎng)T小鼠在肥大軟骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞交界處，成骨細(xì)胞增生較MT小鼠活躍；Tunel法檢測(cè)結(jié)果提示W(wǎng)T小鼠肥大軟骨細(xì)胞的凋亡更明顯，提示FGFR2對(duì)肥大軟骨細(xì)胞的凋亡有促進(jìn)作用。 骨折后第21天，WT小鼠中未見(jiàn)肥大

7、軟骨細(xì)胞和FGFR2、ColX的表達(dá)，骨痂已被大量編織骨所替代；而MT小鼠中仍然有少量被編織骨包繞的肥大軟骨細(xì)胞，這些細(xì)胞表達(dá)FGFR2和ColX，Brdu檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肥大軟骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞交界處，成骨細(xì)胞增生明顯，Tunel法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)被包繞的肥大軟骨細(xì)胞中有正在凋亡的細(xì)胞，未見(jiàn)明顯成骨細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步提示FGFR2對(duì)肥大軟骨細(xì)胞的凋亡有著重要作用。 結(jié)論：根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果，我們可以得出以下結(jié)論：1.FGFR2表達(dá)的部分降低在整