共價(jià)連接法固定化β-半乳糖苷酶及其應(yīng)用研究.pdf

1、本論文以環(huán)氧基改性的D152陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為載體通過(guò)共價(jià)連接的方法固定β-半乳糖苷酶。與傳統(tǒng)的共價(jià)法固定酶相比較，本法具有固定條件溫和、操作工藝簡(jiǎn)單和酶與載體結(jié)合牢固等優(yōu)點(diǎn)，而且所得固定化酶具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)使用性。文中對(duì)β-半乳糖苷酶的固定化條件、固定化酶的性質(zhì)以及固定化酶水解乳糖的動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了系統(tǒng)研究。
　　1.固定化條件研究
　　研究了(NH4)2SO4濃度、加酶量、pH值、溫度和時(shí)間對(duì)改性D152陽(yáng)離子交換樹(shù)脂固

2、定β-半乳糖苷酶的影響，并用紅外光譜和掃描電鏡表征了固定化β-半乳糖苷酶的結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明：在(NH4)2SO4濃度1.75mol·L?1，加酶量1.54U·g?1，pH6.5，溫度35℃和時(shí)間4h的條件下，固定化β-半乳糖苷酶比活力和活力回收率分別為0.127U·g?1和8.25％。
　　2.固定化酶的性質(zhì)研究
　　(1)動(dòng)力學(xué)：研究了時(shí)間、底物濃度、pH值、溫度、激活劑與抑制劑對(duì)固定化β-半乳糖苷酶催化ONPG水解反應(yīng)速率

3、的影響。結(jié)果表明：固定化β-半乳糖苷酶催化ONPG水解的最適pH值和溫度分別為6.5~7.5和35~45℃；Km為245.652μmol·L?1；Ca2+、Mn2+和Fe2+在<10?3mol·L?1時(shí)有激活作用；Mg2+在<10?5mol·L?1時(shí)有激活作用，在>10?4mol·L?1時(shí)有抑制作用；Zn2+在<10?5mol·L?1或>10?4mol·L?1時(shí)起激活作用；Cu2+在<10?5mol·L?1或>10?4mol·L?1時(shí)起

4、抑制作用。
　　(2)穩(wěn)定性：研究了pH值、溫度、時(shí)間和操作對(duì)固定化β-半乳糖苷酶穩(wěn)定性的影響。結(jié)果表明：固定化酶適宜在pH7.5，且低于20℃的環(huán)境中保存；固定化酶在pH7.5，5℃時(shí)半衰期為32d，20℃時(shí)半衰期為28d；批次操作穩(wěn)定性較好，連續(xù)反應(yīng)10次后固定化酶活力保持在85%以上。
　　3.固定化酶水解乳糖的動(dòng)力學(xué)研究
　　研究了乳糖濃度、pH值、溫度和時(shí)間對(duì)固定化β-半乳糖苷酶催化乳糖水解反應(yīng)速率的影響。結(jié)