應用siRNA干擾技術沉默銅綠假單胞菌外排泵基因mexB的蛋白表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
　　觀察siRNA干擾質粒轉入銅綠假單胞菌后,MexB蛋白表達量的變化。
　　方法:
　　針對mexB基因設計合成特異性siRNA分子,與pGPU6/GFP/Neo載體連接,構建pGPU6/GFP/Neo-siRNA重組質粒。構建重組表達質粒pET22b+/mexB,并轉化大腸桿菌BL21(DE3)plysS,誘導表達MexB蛋白,蛋白純化后免疫家兔制備多克隆抗體。siRNA質粒分別電轉化銅綠假單胞菌野生株、臨

2、床耐藥株及mexB基因高表達株,運用westernblot觀察轉化8h、12h、24h后,MexB蛋白表達量的變化。
　　結果:
　　成功構建pGPU6/GFP/Neo-siRNA重組質粒。成功表達銅綠假單胞菌外排泵蛋白MexB,并制備多克隆兔抗。siRNA質粒對銅綠假單胞菌野生菌、臨床耐藥株及mexB基因高表達株的mexB基因均具有良好的沉默效果,而且沉默效果存在時間差異性。
　　結論:
　　siRNA質粒轉化

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