MEIS2通過(guò)BRCA1調(diào)控非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞周期阻滯機(jī)制研究.pdf

1、目的：肺癌是全世界目前面臨的最嚴(yán)重公共健康問(wèn)題之一，MEIS2是HOX基因的輔因子，在胚胎發(fā)育過(guò)程中起著重要的作用，本課題研究目的為探討RNA干擾技術(shù)沉默MEIS2基因?qū)549細(xì)胞凋亡和周期的影響、通過(guò)基因芯片分析技術(shù)探討MEIS2在非小細(xì)胞肺癌中的調(diào)控機(jī)制，及MEIS2與化療敏感性的相關(guān)性。
　　方法：
　?。?）將構(gòu)建成功的4條pLKO.1-MEIS2-MEIS2-shRNA慢病毒載體重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染239FT細(xì)胞，收

2、集病毒液感染A549細(xì)胞（肺腺癌細(xì)胞），顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。運(yùn)用RT-PCR、western blotting檢測(cè)MEIS2基因 mRNA及蛋白的表達(dá)水平，流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期變化。
　?。?）基因芯片及生物信息學(xué)分析基因差異表達(dá)及信號(hào)通路的變化， RT-PCR、western blotting檢測(cè)BRCA1基因mRNA及蛋白的表達(dá)水平。
　?。?）收集宜昌市第一人民醫(yī)院2012年2月至2016年1月住

3、院手術(shù)切除并經(jīng)病理確診NSCLC（非小細(xì)胞肺癌）的石蠟包埋組織標(biāo)本61例，收集整理標(biāo)本對(duì)應(yīng)患者的臨床資料，隨訪患者生存情況。應(yīng)用免疫組化染色法檢測(cè)組織中MEIS2及BRCA1的表達(dá)，分析兩者表達(dá)的相關(guān)性，并將MEIS2、BRCA1表達(dá)納入生存分析，研究?jī)烧吲cNSCLC術(shù)后輔助化療療效之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　?。?）本研究發(fā)現(xiàn)有2條pLKO.1-MEIS2-shRNA重組質(zhì)粒能有效沉默MEIS2的表達(dá)。RT-PCR結(jié)果提示

4、MEIS2 mRNA表達(dá)降低，western blotting結(jié)果提示MEIS2蛋白表達(dá)也降低，光鏡顯示A549細(xì)胞皺縮、密度稀疏、部分死亡；流式細(xì)胞術(shù)提示細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期G2/M期比例增高。
　　（2）基因芯片檢測(cè)DAVID分析發(fā)現(xiàn)DNA復(fù)制及細(xì)胞周期信號(hào)通路基因表達(dá)下調(diào)，BRCA1表達(dá)下調(diào)排第一位。RT-PCR結(jié)果提示BRCA1 mRNA水平降低，Western blot結(jié)果提示BRCA1蛋白表達(dá)也降低。
　?。?）6

5、1例NSCLC患者中，MEIS2和BRCA1的高表達(dá)率分別為57.38％（35/61）和65.57%（40/61），兩者表達(dá)呈正相關(guān)。NSCLC患者接受基于鉑類藥物化療4～6周期化療療效；20例CR+PR（32.8%），41例SD+PD（67.2%），MEIS2低表達(dá)患者有效率為21.3%(13/61)，而MEIS2高表達(dá)有效率為11.5%(7/61)，有極顯著性差異；BRCA1低表達(dá)患者有效率為23.0%(14/61)，而BRCA1高

6、表達(dá)有效率為9.8%(6/61)，有極顯著性差異。
　　結(jié)論：shRNA干擾技術(shù)可介導(dǎo)A549細(xì)胞的MEIS2沉默，MEIS2 mRNA和蛋白水平降低，出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，G2/M期比例增高?；蛐酒夹g(shù)分析提示BRCA1表達(dá)下調(diào)排第一位，A549細(xì)胞BRCA1 mRNA和蛋白水平相應(yīng)降低。BRCA1相關(guān)分子通路可能是MEIS2的重要下游靶通路，提示MEIS2通過(guò)BRCA1基因調(diào)控非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞周期阻滯；免疫組化顯示MEIS