苦蕎堿性提取物的液質(zhì)聯(lián)用分析及其對(duì)2型糖尿病大鼠降糖作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究苦蕎麥堿性提取物的化學(xué)成分及其對(duì)2型糖尿病大鼠降糖作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討，為今后臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.苦蕎堿性提取物的液質(zhì)聯(lián)用分析
　　將50 kg的苦蕎籽粒回流提取，靜置，濃縮，過濾，通過陰陽離子樹脂進(jìn)行柱層析處理，得到堿性提取物。采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)苦蕎堿性提取物中主要化學(xué)成分進(jìn)行分析。
　　2.苦蕎堿性提取物對(duì)2型糖尿病大鼠降糖作用
　　健康SD大鼠（雄性，SPF級(jí)

2、）80只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為2組，即正常組8只、高糖高脂組72只。正常組給予普通飼料喂養(yǎng)。高糖高脂組給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)4周后，腹腔注射1％的鏈脲佐菌素35 mg/kg造2型糖尿病模型，7日后斷尾取血檢測(cè)，以空腹血糖值>=11.1mmol/L為復(fù)制模型成功。將40只成模大鼠隨機(jī)分為5組，即模型組，苦蕎堿性提取物低劑量（43 mg/kg）組，苦蕎堿性提取物高劑量(86 mg/kg)組，二甲雙胍（140 mg/kg）組，阿卡波糖

3、（32 mg/kg）組，每組8只。各組大鼠每天灌胃給藥2次，連續(xù)灌胃6周，每周測(cè)量各組大鼠體重、飲食、飲水并記錄。給藥第1，2，4，6周測(cè)量各組大鼠血糖值及尿量，末次給藥前12 h禁食不禁水。頸總動(dòng)脈取血，留取血清備檢；取血后迅速鈍性剝離腎臟、心臟、胰腺、肝臟等組織，用濾紙吸干水分，精密稱重，計(jì)算臟器指數(shù)（臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量），取部分組織用4%多聚甲醛溶液固定，進(jìn)行HE染色切片，然后在光學(xué)顯微鏡下觀察組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，剩余組織-80

4、℃保存。
　　3.苦蕎堿性提取物對(duì)2型糖尿病大鼠降糖作用機(jī)制研究
　　取濃度分別為62.5 mg/L，125 mg/L，250 mg/L，500 mg/L，1000 mg/L的阿卡波糖和苦蕎堿性提取物采用4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)法測(cè)定α-葡萄糖苷酶的活性。
　　取大鼠肝臟組織，提取肝臟組織RNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)肝臟組織AMPK，PI3K，Akt的mRNA相對(duì)表達(dá)量；同時(shí)，采用蛋白免

5、疫印跡雜交技術(shù)檢測(cè)肝臟組織中PI3K，Akt的蛋白相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1. HPLC-MS分析結(jié)果顯示，苦蕎堿性提取物中含有7種肽類聚合物成分和一種多羥基生物堿。
　　2.苦蕎堿性提取物低劑量組，苦蕎堿性提取物高劑量組可以明顯的降低2型糖尿病大鼠的血糖、減少大鼠飲水量、進(jìn)食量、降低血清胰島素水平、胰島素抵抗指數(shù)和血液糖化血紅蛋白水平。
　　3.各給藥組與模型組的大鼠腎臟指數(shù)、心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)比較無顯著

6、性差異，模型組的大鼠的胰腺指數(shù)高于正常組的大鼠。
　　4.病理學(xué)檢查顯示，各組大鼠的心臟和腎臟無明顯病變，模型組大鼠胰島大小小于正常組，肝臟出現(xiàn)脂肪肝，給藥后，大鼠病變有所改善。
　　5.苦蕎堿性提取物對(duì) a-葡萄糖苷酶的半數(shù)抑制率為116.468±1.065 mg/L。大鼠肝臟中PI3K和Akt基因表達(dá)量明顯上升，AMPK基因表達(dá)量升高但沒有顯著性。大鼠肝臟中 PI3K和 Akt蛋白及 p-PI3K和p-Akt明顯升高。<