霧霾對(duì)小鼠肺巨噬細(xì)胞株IL-17、HDAC2水平變化的影響.pdf

1、目的：慢性阻塞性肺疾?。–hronic obstructive pulmonary disease, COPD）與慢性炎癥有關(guān),主要影響肺實(shí)質(zhì)和外周氣道,導(dǎo)致大部分不可逆和漸進(jìn)的氣流受限。這種炎癥的特點(diǎn)是肺泡巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞（主要是Th1和Th17細(xì)胞亞群）數(shù)量增加,和從循環(huán)中招募的先天淋巴樣細(xì)胞[1]?？諝鈩?dòng)力學(xué)當(dāng)量直徑小于或等于2.5μm的顆粒物,也稱(chēng)細(xì)顆粒物,也是大氣總懸浮顆粒物(Total suspended p

2、articulate matter,TSP)的一部分,屬于具有重要衛(wèi)生學(xué)意義的空氣污染物,可吸附大量的有毒、有害物質(zhì),易進(jìn)入呼吸道深部引發(fā)呼吸道損傷。肺巨噬細(xì)胞是呼吸道內(nèi)部重要的防御屏障,能夠吞噬外來(lái)顆粒物,分解清除外來(lái)細(xì)菌。,肺巨噬細(xì)胞受到損傷,會(huì)釋放大量細(xì)胞因子,增加呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率和死亡率[2]。COPD造成全球健康問(wèn)題的增加,其預(yù)測(cè)和預(yù)后的新的生物學(xué)標(biāo)記物是迫切必要的。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)可入肺細(xì)顆粒物（PM2.5）刺激小鼠肺巨噬細(xì)胞

3、株（RAW264.7細(xì)胞）,觀察白細(xì)胞介素17（Interleukin17,IL-17）及組蛋白去乙?；?2（Histone deacetylase2,HDAC2）水平變化,探討其在PM2.5致病中的作用,及是否 IL-17、HDAC2水平可作為一種很有前途的,很容易檢測(cè)的生物標(biāo)志物。
　　方法：
　　1.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）測(cè)細(xì)胞上清液中IL

4、-17的濃度。首先常規(guī)培養(yǎng)傳代RAW264.7細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5×106／ml,于24孔板中培養(yǎng)過(guò)夜,隨機(jī)分為6組。①對(duì)照組：加入與實(shí)驗(yàn)組等體積的無(wú)血清1640培養(yǎng)液,孵育細(xì)胞；②LPS組：培養(yǎng)液中加入LPS,調(diào)整終濃度100ng／ml,孵育細(xì)胞；③PM2.525ug/ml組：培養(yǎng)液中加入終濃度為25ug/ml PM2.5懸液,孵育細(xì)胞；④PM2.550ug/ml組：培養(yǎng)液中加入終濃度為50ug/ml PM2.5懸液,孵育細(xì)胞；⑤P

5、M2.5100ug/ml組：培養(yǎng)液中加入終濃度為100ug/ml PM2.5懸液,孵育細(xì)胞；⑥PM2.5200ug/ml組：培養(yǎng)液中加入終濃度為200ug/ml PM2.5懸液,孵育細(xì)胞。各組分別刺激12h后取細(xì)胞上清液,-80℃保存,ELISA法檢測(cè)IL-17含量。
　　2.HDAC2活性比色法定量測(cè)定試劑盒檢測(cè)細(xì)胞HDAC2活性。實(shí)驗(yàn)仍按上述分組對(duì)RAW246.7進(jìn)行刺激后,比色法定量檢測(cè)HDAC2活性。
　　結(jié)果：

6、r>　　1.細(xì)胞上清液中 IL-17含量變化。與陰性對(duì)照組比較,LPS刺激RAW264.7細(xì)胞后,細(xì)胞上清液中IL-17含量增加；PM2.5刺激RAW246.7細(xì)胞,IL-17含量亦增加；PM2.5濃度50ug/ml組,IL-17含量最高,PM2.5100ug/ml、200ug/ml組較PM2.5濃度50ug/ml組IL-17含量降低。但比陰性對(duì)照組增高,比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,PM2.5濃度50ug/ml組與PM2.5

7、濃度100ug/ml組IL-17比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.活性比色法定量測(cè)定 HDAC2活性變化：與陰性對(duì)照組比較,LPS刺激 RAW246.7細(xì)胞后,細(xì)胞 HDAC2活性有所降低；PM2.5刺激RAW264.7細(xì)胞,細(xì)胞HDAC2活性降低,且隨PM2.5濃度增高,HDAC2活性顯著降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.PM2.5不同濃度組刺激分泌IL-17增加,提示IL-17參與了細(xì)胞損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。