霧霾對小鼠肺巨噬細胞株IL-17、HDAC2水平變化的影響.pdf

1、目的：慢性阻塞性肺疾病（Chronic obstructive pulmonary disease, COPD）與慢性炎癥有關(guān),主要影響肺實質(zhì)和外周氣道,導(dǎo)致大部分不可逆和漸進的氣流受限。這種炎癥的特點是肺泡巨噬細胞、中性粒細胞、T淋巴細胞（主要是Th1和Th17細胞亞群）數(shù)量增加,和從循環(huán)中招募的先天淋巴樣細胞[1]。空氣動力學(xué)當(dāng)量直徑小于或等于2.5μm的顆粒物,也稱細顆粒物,也是大氣總懸浮顆粒物(Total suspended p

2、articulate matter,TSP)的一部分,屬于具有重要衛(wèi)生學(xué)意義的空氣污染物,可吸附大量的有毒、有害物質(zhì),易進入呼吸道深部引發(fā)呼吸道損傷。肺巨噬細胞是呼吸道內(nèi)部重要的防御屏障,能夠吞噬外來顆粒物,分解清除外來細菌。,肺巨噬細胞受到損傷,會釋放大量細胞因子,增加呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率和死亡率[2]。COPD造成全球健康問題的增加,其預(yù)測和預(yù)后的新的生物學(xué)標(biāo)記物是迫切必要的。本實驗通過可入肺細顆粒物（PM2.5）刺激小鼠肺巨噬細胞

3、株（RAW264.7細胞）,觀察白細胞介素17（Interleukin17,IL-17）及組蛋白去乙酰化酶-2（Histone deacetylase2,HDAC2）水平變化,探討其在PM2.5致病中的作用,及是否 IL-17、HDAC2水平可作為一種很有前途的,很容易檢測的生物標(biāo)志物。
　　方法：
　　1.酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）測細胞上清液中IL

4、-17的濃度。首先常規(guī)培養(yǎng)傳代RAW264.7細胞,調(diào)節(jié)細胞濃度為5×106／ml,于24孔板中培養(yǎng)過夜,隨機分為6組。①對照組：加入與實驗組等體積的無血清1640培養(yǎng)液,孵育細胞；②LPS組：培養(yǎng)液中加入LPS,調(diào)整終濃度100ng／ml,孵育細胞；③PM2.525ug/ml組：培養(yǎng)液中加入終濃度為25ug/ml PM2.5懸液,孵育細胞；④PM2.550ug/ml組：培養(yǎng)液中加入終濃度為50ug/ml PM2.5懸液,孵育細胞；⑤P

5、M2.5100ug/ml組：培養(yǎng)液中加入終濃度為100ug/ml PM2.5懸液,孵育細胞；⑥PM2.5200ug/ml組：培養(yǎng)液中加入終濃度為200ug/ml PM2.5懸液,孵育細胞。各組分別刺激12h后取細胞上清液,-80℃保存,ELISA法檢測IL-17含量。
　　2.HDAC2活性比色法定量測定試劑盒檢測細胞HDAC2活性。實驗仍按上述分組對RAW246.7進行刺激后,比色法定量檢測HDAC2活性。
　　結(jié)果：

6、r>　　1.細胞上清液中 IL-17含量變化。與陰性對照組比較,LPS刺激RAW264.7細胞后,細胞上清液中IL-17含量增加；PM2.5刺激RAW246.7細胞,IL-17含量亦增加；PM2.5濃度50ug/ml組,IL-17含量最高,PM2.5100ug/ml、200ug/ml組較PM2.5濃度50ug/ml組IL-17含量降低。但比陰性對照組增高,比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,PM2.5濃度50ug/ml組與PM2.5

7、濃度100ug/ml組IL-17比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.活性比色法定量測定 HDAC2活性變化：與陰性對照組比較,LPS刺激 RAW246.7細胞后,細胞 HDAC2活性有所降低；PM2.5刺激RAW264.7細胞,細胞HDAC2活性降低,且隨PM2.5濃度增高,HDAC2活性顯著降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.PM2.5不同濃度組刺激分泌IL-17增加,提示IL-17參與了細胞損傷的發(fā)生發(fā)展過程。