毛細(xì)管電泳-Ag(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光法在環(huán)境雌激素和糖肽類抗生素檢測中的應(yīng)用研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳(Capillary electrophoresis,CE)是一類以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場為驅(qū)動力的液相分離分析技術(shù)。自20世紀(jì)80年代問世以來,其理論、分離模式、儀器和應(yīng)用始終是高度活躍的研究領(lǐng)域。由于其具有分離能力強、分離速度快、耐用性好和成本低等優(yōu)點,使其在法醫(yī)學(xué)、醫(yī)藥科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、生物技術(shù)等諸多領(lǐng)域獲得了廣泛應(yīng)用。化學(xué)發(fā)光(Chemiluminescence,CL)分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光輻射確定物質(zhì)含量

2、的一種痕量分析方法。它具有靈敏度高、成本低廉、組裝簡便、不需要光源,避免了背景光和雜散光的影響等特點。因此,將CE與CL聯(lián)合使用,可兼具兩者優(yōu)點,具有很大優(yōu)勢。
　　Ag(Ⅲ)配合物([Ag(HIO6)2]5-)是一種新型氧化劑,在堿性介質(zhì)中可氧化魯米諾產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。某些物質(zhì)可增強或抑制Ag(Ⅲ)配合物與魯米諾的化學(xué)發(fā)光強度,在一定濃度范圍內(nèi)其增強或抑制程度與物質(zhì)的濃度呈良好線性關(guān)系,據(jù)此可建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出該物質(zhì)的實際濃度。本研

3、究就是根據(jù)這一原理,建立了毛細(xì)管電泳-Ag(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光法同時檢測牛奶中4種環(huán)境雌激素類(雌二醇,4-壬基酚,己烯雌酚,雙酚A)殘留以及同時檢測人血清中的萬古霉素和去甲萬古霉素的新方法。本方法成本低廉、操作簡便、對環(huán)境友好、結(jié)果靈敏可靠。
　　第一部分：毛細(xì)管電泳化學(xué)發(fā)光法同時檢測牛奶中4種環(huán)境雌激素類殘留
　　目的:建立毛細(xì)管電泳-Ag(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光法同時檢測牛奶中雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚和

4、雙酚A的新方法,并應(yīng)用于牛奶中這4種環(huán)境雌激素的分離和測定。
　　方法:雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚和雙酚A在毛細(xì)管中電泳分離后,分別與Ag(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系發(fā)生反應(yīng)并對其化學(xué)發(fā)光信號產(chǎn)生明顯抑制作用,在一定濃度范圍內(nèi),抑制程度與樣品濃度呈線性關(guān)系,據(jù)此建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。對實驗條件進行優(yōu)化,得出最佳實驗條件為Ag(Ⅲ)配合物濃度為1.0×10-4 mol/L,Ag(Ⅲ)配合物溶液p H值為12.52,其中Na OH濃度為

5、0.04 mol/L,Na2CO3濃度為0.04 mol/L,緩沖溶液的p H值為9.21,其中魯米諾濃度為3.0 mmol/L,Na2CO3、Na HCO3的濃度均為6mmo/L,分離電壓為14 k V,進樣時間為6 s。用乙腈除去牛奶樣品中的蛋白質(zhì)并取上清液,氮氣吹干、復(fù)溶、過濾之后進樣分析。
　　結(jié)果:在最佳分離檢測條件下,雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚的線性范圍均為0.5~30μg/ml,檢出限均為0.25μg/ml,雙酚A

6、的線性范圍為0.5~20μg/ml,檢出限為0.1μg/ml。雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚和雙酚A的回歸方程分別為ΔI=4.798c+20.477、ΔI=5.2948c+19.616、ΔI=5.8843c+30.847、ΔI=10.2c+29.885,R2分別為0.9982、0.9980、0.9964、0.9965,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為2.49％、1.45%、2.33%、2.37%,平均回收率分別為88.68%、90.48%、101

7、.57%、97.18%。
　　結(jié)論:建立了毛細(xì)管電泳-Ag(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光法同時檢測牛奶中雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚和雙酚A的新方法,本方法操作簡便,儀器成本低廉,對環(huán)境友好,效果令人滿意。
　　第二部分：毛細(xì)管電泳化學(xué)發(fā)光法同時檢測人血清中的萬古霉素和去甲萬古霉素
　　目的:建立毛細(xì)管電泳-Ag(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光法同時檢測人血清中萬古霉素和去甲萬古霉素的新方法,并應(yīng)用于人血清中萬古霉素和去甲萬

8、古霉素的測定。
　　方法:將血清樣品用C18固相萃取小柱進行濃縮和凈化,用濾膜過濾之后進樣。在優(yōu)化好的實驗條件下,即Ag(Ⅲ)配合物溶液p H值為12.17,濃度為1.0×10-4 mol/L,Na OH濃度為0.05 mol/L,緩沖液中魯米諾濃度為3.5 mmol/L,Na2B4O7和Na2CO3的濃度分別為17.5 mmol/L和5 mmol/L,p H值為8.94,分離電壓為15 k V,進樣時間為10 s,對樣品進行分析

9、。萬古霉素和去甲萬古霉素經(jīng)毛細(xì)管電泳分離,分別與Ag(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系作用,對其化學(xué)發(fā)光信號均產(chǎn)生明顯的抑制作用,在一定濃度范圍內(nèi),抑制程度與樣品濃度呈線性關(guān)系,據(jù)此建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出實際樣品濃度。
　　結(jié)果:在最佳分離檢測條件下,萬古霉素和去甲萬古霉素的線性范圍均為5~80μg/ml,萬古霉素的回歸方程為ΔI=0.7326c+4.0738,R2=0.9986,去甲萬古霉素的回歸方程為ΔI=0.6000c+2.000