中藥材中酚酸類與黃酮類抗乳腺癌活性成分群的篩選及測定.pdf

1、目的：
　　本論文在前期基礎(chǔ)上進(jìn)一步拓展、研究了中空纖維細(xì)胞捕獲-高效液相色譜法（Hollow fiber cell fishing with high performance liquid chromatography, HFCF-HPLC）在中藥活性篩選中的應(yīng)用，并提出和建立了兩相/三相中空纖維液相協(xié)同微萃?。?Two-phase/three-phase hollow fiber liquid phase synergisti

2、c microextraction,2p/3p-HF-LPSME）法，對篩選出的已知活性成分進(jìn)行定量測定。
　　方法：
　　將種植MCF-7細(xì)胞的中空纖維插入中藥金銀花、蒲公英和杜仲水煎液中，對酚酸類和黃酮類化合物進(jìn)行同時篩選、捕獲，通過與對照品的保留時間比對，確定了部分被篩選出來的活性化合物的結(jié)構(gòu)；另外，我們應(yīng)用從MCF-7活細(xì)胞中分離得到的細(xì)胞膜和細(xì)胞器以及與癌細(xì)胞相關(guān)的受體（雌激素受體，表皮生長因子受體和環(huán)氧酶-2），

3、初步研究酚酸類和黃酮類化合物在 MCF-7細(xì)胞上的結(jié)合部位和結(jié)合位點(diǎn)，比較并討論了活性化合物與這些靶點(diǎn)的結(jié)合能力。在基本明確金銀花、蒲公英、杜仲活性成分和作用特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，我們將內(nèi)腔載有水溶性和脂溶性接受相的不同中空纖維置于同一中藥提取液中，對酚酸類和黃酮類活性成分分別進(jìn)行萃取和濃縮。萃取結(jié)束后，將2支纖維內(nèi)的接受相用注射器推出轉(zhuǎn)移到同一Ep管中，并用適量甲醇稀釋，混合均勻后，進(jìn)行HPLC分析。
　　結(jié)果：
　　對HFCF-

4、HPLC，詳細(xì)考察了種植人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的中空纖維表面特性，種植細(xì)胞的存活率，篩選活性成分后細(xì)胞的死亡率；纖維活性中心與目標(biāo)分析物間的非特異性結(jié)合；陽性和陰性對照試驗(yàn)，HFCF-HPLC法的重現(xiàn)性和可靠性；重新定義和完善了活性化合物的細(xì)胞/靶點(diǎn)捕獲因子。對2p/3p-HF-LPSME，優(yōu)化了萃取劑種類，樣品相和接受相的pH，萃取時間，攪拌速率，樣品溶液中鹽濃度和體積等影響2p/3p-HF-LPSME萃取結(jié)果的主要因素；考察了2p/

5、3p-HF-LPSME結(jié)合HPLC分析測定方法的方法學(xué)參數(shù)，該法對酚酸類和黃酮類活性成分的富集倍數(shù)的范圍為9-171、線性范圍為綠原酸：0.0064-32.0μg mL-1；咖啡酸：0.0016-1.6μg mL-1；對羥基桂皮酸：0.0038-7.5μg mL-1；阿魏酸：0.0009-1.8μg mL-1；蘆?。?.0200-4.0μg mL-1；木犀草苷：0.0032-6.4μg mL-1；槲皮素：0.0036-3.6μg mL-

6、1；（r=0.9939-0.9996），精密度為2.3％-10.4%，回收率為90.0%-106.3%，檢測限為0.3-4.0 ng mL-1。
　　結(jié)論：
　　HFCF-HPLC是一種簡單、快速、有效的篩選中藥生物活性成分、研究活性成分作用靶點(diǎn)的方法；2p/3p-HF-LPSME結(jié)合HPLC是一種高濃縮、高靈敏的低豐度活性成分測定技術(shù)。HFCF-HPLC結(jié)合2p/3p-HF-LPSME已成功應(yīng)用于金銀花、蒲公英和杜仲中微量