UBE2Q1的異常表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是世界上最常見的癌癥之一。有研究報(bào)道，泛素蛋白酶體系統(tǒng)（ubiquitin-proteasome system,UPS）參與了蛋白質(zhì)降解的調(diào)控，在HCC以及其他惡性腫瘤的病理生理學(xué)過程中扮演著關(guān)鍵角色。泛素接合酶E2Q1（ubiquitin-conjugating enzyme E2Q1, UBE2Q1）作為一種E2泛素接合酶類，可能參與了癌癥相關(guān)

2、蛋白的調(diào)控。本研究旨在分析UBE2Q1在HCC中的表達(dá)情況及其與HCC患者預(yù)后的關(guān)系，并進(jìn)一步探討UBE2Q1的異常表達(dá)在HCC發(fā)生發(fā)展過程中的意義。
　　方法：
　　1.從組織學(xué)角度研究，首先通過Western blot方法，檢測在8對新鮮HCC及其對應(yīng)的癌旁組織中UBE2Q1蛋白的表達(dá)情況；然后，運(yùn)用免疫組化方法檢測86例HCC組織標(biāo)本中UBE2Q1和增殖指標(biāo)Ki-67的表達(dá)情況，并采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析UBE2Q1、Ki-

3、67的表達(dá)情況與HCC癌患者的性別、年齡、腫瘤體積大小、組織學(xué)分級以及腫瘤轉(zhuǎn)移等臨床病理因素之間的相關(guān)性。通過Kaplan-Meier法分析UBE2Q1的表達(dá)與HCC患者生存率之間的相關(guān)性；運(yùn)用單因素和Cox危險(xiǎn)比例模型多因素分析進(jìn)一步探究UBE2Q1的表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌患者預(yù)后之間的關(guān)系。
　　2.從細(xì)胞學(xué)角度研究，選取高表達(dá)UBE2Q1的BEL-7404、HepG2細(xì)胞株作為研究對象，血清饑餓釋放同步化處理后運(yùn)用Western

4、blot方法檢測UBE2Q1蛋白表達(dá)水平變化，探究其在腫瘤細(xì)胞增殖過程中的潛在作用。
　　3.從分子生物學(xué)角度研究，通過小干擾RNA的方式下調(diào)BEL-7404、HepG2細(xì)胞中UBE2Q1的內(nèi)源性表達(dá)，然后采用 CCK-8、細(xì)胞流式分析等方法檢測 UBE2Q1表達(dá)的下調(diào)對細(xì)胞增殖以及細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組化及Western blot法檢測均顯示，UBE2Q1在HCC組織中的表達(dá)明顯高于相對應(yīng)的癌旁

5、肝組織。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示UBE2Q1的表達(dá)強(qiáng)度與HCC組織學(xué)分級（P<0.001）之間的關(guān)系有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，相關(guān)性分析表明UBE2Q1與Ki-67表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.639，P<0.01）；Kaplan-Meier分析顯示UBE2Q1在HCC中的高表達(dá)與患者總生存率的降低顯著相關(guān)（P=0.001）；單因素分析表明UBE2Q1與HCC患者的不良預(yù)后有關(guān)（P<0.001）；Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示UBE2Q1可做為HCC患者預(yù)后的一種獨(dú)立指

6、標(biāo)（P=0.002）。
　　2.通過血清饑餓的方式使BEL-7404、HepG2細(xì)胞生長周期停滯，血清釋放后刺激BEL-7404、HepG2細(xì)胞增殖；Western blot結(jié)果顯示UBE2Q1﹑PCNA蛋白隨著細(xì)胞周期的進(jìn)展表達(dá)增加，而p53、p21蛋的白表達(dá)卻下降。
　　3. siRNA分析顯示，UBE2Q1表達(dá)的下調(diào)可引起B(yǎng)EL-7404、HepG2細(xì)胞增殖水平的下降及其細(xì)胞周期的停滯。
　　結(jié)論：
　　1

7、. UBE2Q1在HCC中高表達(dá)，并且可作為HCC患者一種獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。UBE2Q1的高表達(dá)提示HCC患者的預(yù)后不良。上述結(jié)果均說明UBE2Q1可能與HCC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。
　　2. UBE2Q1的表達(dá)在血清饑餓的BEL-7404、HepG2細(xì)胞中逐漸增加，提示UBE2Q1與HCC細(xì)胞的增殖過程相關(guān)。siRNA干擾BEL-7404、HepG2細(xì)胞中UBE2Q1的內(nèi)源性表達(dá)后，p53、p21在BEL-7404、HepG2細(xì)胞中的表