一種基于PHA合成調控蛋白PhaR的新型可定量檢測蛋白質相互作用的大腸桿菌雙雜交系統(tǒng).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、聚羥基脂肪酸酯(PHA)合成調控蛋白PhaR由兩個不同的結構域組成:DNA結合域(DBD)和PHB顆粒結合域(GBD)。PhaR錨定在PHA顆粒結合蛋白PhaP的啟動子區(qū)域,從而抑制PhaP的表達。聚羥基丁酸酯(PHB)是PHA最簡單的一類,當PHB顆粒在體內積累時,PhaR與PHB顆粒結合促使PhaR從phaP啟動子區(qū)域釋放,進而催動phaP基因的表達?；谶@個調控機制,我們開發(fā)了一種新型的細菌雙雜交系統(tǒng)用于檢測蛋白質間的相互作用,P

2、haR被分成兩部分:DNA結合域DBD與誘餌蛋白融合,PHA顆粒結合域GBD與獵物蛋白融合,phaP被報告基因β-半乳糖苷酶基因lacZ代替?？赡苡捎谑杷园被岬暮窟^高,GBD蛋白在體內表達后形成包涵體。所以,我們用同樣與PHB顆粒有強結合能力的PhaP替代了GBD.為了研究該系統(tǒng)的可行性,我們選擇了三組相互作用的模式蛋白bFos,bJun與bATF2。通過較高的β-半乳糖苷酶表達結果,顯示bFos,bJun與bATF2之間可以兩兩

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